1. 1細胞瞬時轉染
原理:
通過脂質體介導轉染法及電穿孔等基因轉染技術,將靶基因導入細胞,一
般在轉染后48小時左右,靶基因即可在細胞內表達。根據不同的實驗目的,48小時后即可進行靶基因表達的檢測等實驗。
應用:
觀察目的基因及其表達蛋白在某種細胞中的功能(短時間即可進行觀察,但效應會很快丟失)
一般流程:
1) 細胞接種:轉染實驗前天接種細胞,各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉染當天細胞密度應達到60%~80%覆蓋
2) 細胞轉染(脂質體、電穿孔、FuGENE 6等)
3) 48小時以后鑒定目的基因的表達情況
前期準備:
l 構建好的外源基因載體,或目的基因基本信息
l 待轉染的細胞系(1×106個細胞,可傳代,倍增時間小于48小時)以及細胞培養條件的說明
l 若需要檢測靶基因的表達,請提供相應抗體
結果呈現:
構建好的瞬時轉染細胞及相關的外源基因表達分析
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