*，在液相色譜分析中，色譜柱良好的分離效率是成功分離的一個重要前提，若系統(tǒng)采用了不適當?shù)倪B接方式或者應用不正確的毛細管，均可能導致產(chǎn)生不良的峰擴寬，色譜柱的*分離效率就更無從談起。甚至還可能發(fā)生使用的柱子越細，其洗脫峰的擴寬反而越大的情況。本文將詳細介紹毛細管對液相色譜分離的影響，以及如何選擇正確的毛細管與連接方式。

液相色譜柱良好的分離效率是色譜成功分離的一個重要前提，不適當?shù)墓苈愤B接或毛細管的使用不當，均可能導致不良的峰擴寬，因此需要特別注意。當使用4.6×250mm的“老式”標準分離柱時, 毛細管的作用和管路連接的影響還不是很突出；而當使用2.0×100mm的細徑色譜柱時，其對色譜分離的影響就很大。

對于“Ex-柱”而言，造成峰擴寬的主要原因在于管路連接中使用了錯誤的毛細管和空腔，它們會顯著地擴張淋洗通道。因此，在原則上應該盡可能地采用窄小的柱徑，并適當?shù)乜s短連接管路。

如果用戶使用的是由同一制造商供應的配套設備或緊密裝配型液相色譜儀，那么所有的管路連接已經(jīng)由供應商預先優(yōu)化了。這類設備出現(xiàn)問題的情況僅在于：需要聯(lián)接另外一家公司的檢測器時，或者需要用不同的組件來自行組裝一套HPLC系統(tǒng)。

通過分離柱的峰寬度是與色譜柱的尺寸成正比的，簡而言之：細柱產(chǎn)生窄峰。液體輸導產(chǎn)生的峰擴寬則會牽涉到整個系統(tǒng)，因而需要對其逐一進行協(xié)調(diào)。

泊肅葉定律

法國物理學家吉恩·倫納德·泊肅葉對血液循環(huán)系統(tǒng)生理學的興趣促成了他在1840年對液體在細管中的流體行為進行了基礎性的實驗研究。在樣品和洗脫液之間不是形成一個直界面，而是層流的形式。

在直徑為“dt”的管子內(nèi)（液相色譜毛細管）流體的不同流速構(gòu)成一個“U”型（如圖2所示）。

為了盡量減少峰寬，應選擇盡可能小的管道直徑。樣品分子有一種向流體邊界擴散的趨勢。假如沒有這個擴散，洗脫峰將是無限寬的，因為根據(jù)泊肅葉理論，流速在毛細管管壁處為零，因而樣品分子在這一點上將是極其緩慢地前行。而擴散的作用則導致了樣品分子由管壁遷移到管子中部，因而，樣品峰得以在有限的時間內(nèi)洗脫，并呈現(xiàn)有限的峰寬。

毛細管的優(yōu)化

液相色譜系統(tǒng)可以有多種不同的安裝方式，那么，我們是否應該盡可能地縮短進樣器與色譜柱之間的連接？還是縮短色譜柱與檢測器之間的連接？或者兩者均可？這是不能隨意而為的，而且其應用程式還不能隨意推廣到任何一個液相色譜系統(tǒng)。下面的實驗將為您清楚地演示毛細管對液相色譜系統(tǒng)的影響。

實驗裝置

帶有10μl樣品環(huán)的Rheodyne7125注射器，UV檢測器設在254nm，色譜柱4.6×100mm使用的是5-μ柱材料，流速為1ml/min以及8μl樣品檢測池，這些都是“標準”液相色譜的條件。如果使用0.13mm內(nèi)徑的毛細管，色譜柱和檢測器之間的連接長度則對系統(tǒng)的影響不大。只要將毛細管的直徑加倍（這里用到0.25mm），分離效率即隨連接長度的增加而顯著地降低（如圖3所示）。

小體積HPLC色譜柱

在使用細而短的色譜柱的情況下（例如2.0×100mm，流量200μl/min）,毛細管的影響甚至更具破壞性。若采用0.13mm內(nèi)徑的毛細管和80cm的連接長度，即可觀察到低于18％的峰展寬。如果使用0.25mm的毛細管，即使是5cm的短連接，分離效果則會明顯差了很多，而使用更長的毛細管則會導致分離毫無意義（如圖4所示）。

分離小體積樣品

在液相色譜系統(tǒng)中，應用的液相色譜柱體積越小，毛細管的影響就越大。因此，在液相色譜系統(tǒng)中如果不對其他組件（特別是它們之間的連接）進行優(yōu)化，僅裝置一根微孔柱是沒有意義的。進樣器-色譜柱-樣品檢測池之間的線路連接對分離質(zhì)量具有特別的重要性。

小體積HPLC色譜柱

在使用細而短的色譜柱的情況下（例如2.0×100mm，流量200μl/min）,毛細管的影響甚至更具破壞性。若采用0.13mm內(nèi)徑的毛細管和80cm的連接長度，即可觀察到低于18％的峰展寬。如果使用0.25mm的毛細管，即使是5cm的短連接，分離效果則會明顯差了很多，而使用更長的毛細管則會導致分離毫無意義（如圖4所示）。

分離小體積樣品

在液相色譜系統(tǒng)中，應用的液相色譜柱體積越小，毛細管的影響就越大。因此，在液相色譜系統(tǒng)中如果不對其他組件（特別是它們之間的連接）進行優(yōu)化，僅裝置一根微孔柱是沒有意義的。進樣器-色譜柱-樣品檢測池之間的線路連接對分離質(zhì)量具有特別的重要性。