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來源:上海乾思生物科技有限公司   2018年10月10日 18:43  

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實驗前要準備好相應試劑 提前將所有試劑平衡到室溫環境,這個過程大致需半小時左右。洗液是濃縮液,如有結晶析出,需*溶解后再進行稀釋。A、B 兩管顯色底物在使用前15分鐘按 1:1 配成混合液。為保證蛋白標準品溶液配制質量,蛋白標準品為凍干粉,重溶前需將管子離心,加入說明書的緩沖液,慢速在搖床上搖勻或顛倒混勻,至少 15 分鐘,不建議用槍頭吹打。溶解后如需保存,按每次使用量分裝后根據說明書要求的溫度保存。梯度稀釋蛋白標準品時,建議用聚丙烯管(對蛋白吸附力很低),每步都要充分混勻且更換新槍頭,確保梯度準確性。

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●使用 RIPA 提取的總蛋白總結●: 1. 并非是真正意義上的總蛋白,相當一部分蛋白丟失在棄去的不可溶組分中。 2. 很多常用的內參,如 Actin,tubulin,LaminA,H3 等均在 RIPA 不可溶組分中被丟失。 3. 目標蛋白可能會在 RIPA 不可溶組分中被丟失,也可能不被丟失,具有不可預見性,非選擇性。 4. 同種蛋白在不同樣品中丟失的情況并不相同,蛋白丟失并不成比例。 5. 利用目的蛋白和內參比值做校正會出現偏差,不適合 WB 目的蛋白的半定量分析。

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編輯:小檀20181010

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