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elisa常規(guī)指標(biāo)實(shí)驗(yàn)常見問題之白介素

來源:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司   2018年10月16日 16:23  

    elisa試劑盒在實(shí)際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀,這對于實(shí)現(xiàn)elisa標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。

    白介素elisa試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗(yàn)的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟發(fā),提高試驗(yàn)質(zhì)量。下面,分析白介素elisa試劑盒試驗(yàn)操作中的一些常見問題:

一、選擇試劑
選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

二、加樣
可能原因:
1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣; 
2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 
3)加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。

解決辦法:
1) 標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 
2) 加樣后及時放入孵箱。 
3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 
4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 
5) 標(biāo)本較多時,請分批操作。

三、 孵育
可能原因:
1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*; 
2) 孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。

解決辦法:
1) 貼封片或加蓋; 
2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。

四、洗板
ELISA試劑盒可能原因:
1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 
2) 采用半自動洗板機(jī)洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。 
3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。

解決辦法:
1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干。 
2) 合理安排,或多用幾臺洗板機(jī)。

五、顯色
可能原因:
1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑; 
2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。

解決辦法: 
1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用。
2) 加樣時保持顯色劑不外流。 
3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。

六、終止
可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。

七、讀板
如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,有效提高檢測質(zhì)量。

    以上就是恒遠(yuǎn)為您解析的elisa白介素指標(biāo)在實(shí)驗(yàn)過程中遇到的常見問題的原因及解答,希望對您能有所幫助,另外,上海恒遠(yuǎn)ELISA試劑盒均經(jīng)過嚴(yán)格交叉反應(yīng)和干擾測試及穩(wěn)定性試驗(yàn),作為一種分析檢測試劑,具有*反應(yīng)模式,可滿足廣泛的檢測需求,新老客戶一致認(rèn)為質(zhì)量好,價格低,是同類產(chǎn)品中的的,公司擁有配置完善的售后服務(wù)和免費(fèi)的技術(shù)支持,讓您無后顧之憂。想了解更多精彩內(nèi)容,請鎖定上海恒遠(yuǎn)!

  

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