ELISA試劑盒是一種敏感性高,特異性強,重復性好的試驗確診辦法。由于其試劑安穩、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等要素,已廣泛應用在免疫學查驗的各范疇中。ELISA試劑盒是用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗小鼠磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)ELISA檢測試劑盒。
長處:
一、、活絡、特異的抗體;
二、安穩的重復性和可靠性;
三、吸附功能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
四、適用血清、血漿、安排勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型;
五、節約試驗經費。
運用辦法:
1、 血清:操作過程中防止任何細胞影響。運用不含熱原和內毒素的試管。搜集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞敏捷小心地別離。
2、 血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 安排勻漿:將安排參加適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
5、 保存:假如樣品不當即運用,應將其分成小部分-70℃保存,防止重復冷凍。盡可能的不要運用溶血或高血脂血。假如血清中很多顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱凍結。應在室溫下凍結并保證樣品均勻地充沛凍結。
在ELISA中,進行各項試驗條件的挑選是很重要的,其間包含:
(1) 固相載體的挑選:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。現在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體,在運用前均可進行挑選:用等量抗原包被,在同一試驗條件下進行反響,調查其顯色反響是否均一性,據此判明其吸附功能是否杰出。
(2) 包被抗體(或抗原)的挑選:將抗體(或抗原)吸附在固相載體外表時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時刻及其蛋白量也有必定影響,一般多選用4℃ 18~24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相一起,調查陽性標本的OD值。挑選OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。關于大都蛋白質來說一般為1~10μg/ml。
(3) 酶符號抗體作業濃度的挑選:首先用直接ELISA法進行開始效價的滴定(見酶符號抗體部份)。然后再固定其它條件或采納“方陣法”(包被物、待檢樣品的參閱品及酶符號抗體分別為不同的稀釋度)在正式試驗體系里地滴定其作業濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的挑選:對供氫體的挑選要求是價廉、安全、有明顯地顯色反響,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌效果,應留意防護。有條件者應運用不致癌、活絡度高的供氫體,如TMB和ABTS是現在較為滿足的供氫體。底物效果一段時刻后,應參加強酸或強堿以終止反響。一般底物效果時刻,以10-30分鐘為宜。底物運用液有必要新鮮制造,尤其是H2O2在臨用前參加。
elisa試劑盒回收率是反響待測物在樣品剖析過程中的丟失的程度,丟失越少,回收率越高,假如作標液1PPM,就是1毫克/升,而作出規范數據為0.99毫克/升,就是說你的回收率是99%,這個與實在成分有親近的聯系,闡明辦法的度。比方水中總無機氯含量測定,樣品水中含有無機氯20mg/L,取100mL被測水樣品,參加0.1mL濃度為10mg/mL的含無機氯規范樣品,測守時疏忽體積變化,假如測定出樣品中無機氯為2.98mg/L,則以為回收率為98%。
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