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ELISA試劑盒樣本處理及要求

來源:研域生物技術(上海)有限公司   2018年11月16日 09:22  

ELISA試劑盒樣本處理及要求
   ELISA試劑盒用于測定血清,血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本,供應的種屬有:人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、豬犬、牛羊 、雞鴨、植物ELISA試劑盒等。
   ELISA試劑盒可用于測定抗體,也可用于檢測杭原。其基本原理是采用抗原與抗體的特異反應將待測物與酶連接,然后通過酶與底物產生顏色反應,用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。3種必要的試 劑:①固相的抗原或抗體(免疫吸附劑);②酶標記的抗原或抗體(標記物);③酶作用的底物(顯色劑)。
   ELISA試劑盒過程包括:抗原吸附在固相載體上,這個過程稱為包被,加待測抗體,再加相應酶標記抗體,生成抗原--待測抗體--酶標記抗體的復合物,再與該酶的底物反應生成有色產物。借助分光光度計的光吸收 計算抗體的量。
   ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中 大鼠葉酸(FA)水平。用純化的大鼠葉酸(FA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入大鼠葉酸(FA),再與HRP標記的 大鼠葉酸(FA)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的。顏色的深淺和樣品中的大鼠葉酸(FA)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中 大鼠葉酸(FA)濃度。
   樣本處理及要求:
   1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
   2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
   3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
   4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。ELISA試劑盒保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
   5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
   6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.

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