培養細胞常規方法需用二氧化碳溫箱，且為保持箱內二氧化碳氣5%～10%的濃度，需持續輸入二氧化碳氣體。為此，箱內的培養瓶蓋不能擰緊以便二氧化碳氣體自由進出。

步，配制1L培養液。培養基中含有酚紅指示劑，偏堿時液體為深紅或紫色，偏酸時則呈黃色。取配1L培養液的粉劑培養基，加入750ml三蒸水或去離子水，搖勻(一般培養液呈橘紅色)；再加入碳酸氫鈉1～1．1g，至*溶解(呈深紅色)；后再加三蒸水或去離子水至1L止。

第二步，插吸管于配好的培養液內，通入二氧化碳氣體。隨著二氧化碳氣的融人，液體逐漸變成黃色。用一次性0．22 m孔徑的濾膜于正壓情況下將該液體過濾除菌。在此過程中，由于部分二氧化碳氣體溢出，液體漸成橘黃色。此時迅速將其分裝到4個250ml的瓶內，一定塞嚴或擰緊瓶。在無菌情況下取樣本數毫升，37。c無菌培養72h，確定該批培養液無污染后方可使用。常使用的培養液存放于4℃冰箱內，其它暫時不用的可放入一20。c冰箱內保存。

第三步，根據不同細胞系的需求添加不同量血清和抗生素。將配好的培養液吸入小培養瓶內，再將適量細胞吸入，塞嚴或擰緊瓶蓋，置37。c普通隔水式恒溫箱內即可。操作過程中因有少量二氧化碳氣體溢出，液體呈橘紅色，酸堿度(pH) 約為7．0～7．2。如果細胞較少或者生長較慢，液體的pH值似宜偏酸些為好。