植物細胞組織培養

    實驗目的

    植物細胞和組織培養的技術性強，要求無菌操作，通過本實驗可初步掌握常規的組織培養技術，加深對無菌操作的了解。

    二．實驗原理

    植物的性：植物體的任何一個細胞都具有生長分化成為一個完整植株的能力，稱為植物的性。

    植物組織培養就是利用植物的性進行離體無菌植物培養的一門技術。植物組織培養按其原始意義，就是指愈傷組織培養。但發展至今，其范圍日益擴大，已包括植物和它的離體器官、組織、細胞和原生質體的離體無菌培養。因此，擁有幾種不同水平的培養技術，即整體的、器官的、組織的、細胞的和原生質的培養技術。

    本實驗選擇豌豆為材料，豌豆（Pisumsativum）屬豆科植物，是糧食、飼料和重要的蔬菜作物，也是遺傳學家和植物生理學家感興趣和樂于采用的實驗植物，豌豆的根、莖、子葉、下胚軸、上胚軸、花芽等外植體，皆可形成愈傷組織，其中莖尖、幼胚、幼葉等器官可成功的再生成植株。莖尖培養可包括小至十幾微米的莖尖分生組織（生長點）和大至幾十毫米的莖尖或更大的芽培養。在實踐應用上，常采用生長點的培養使患病植物去病毒，以達到挽救優良品種，提高產量和質量之目的。

    三．實驗材料

    儀器設備：1．酒精燈、三角燒瓶，培養皿；2．鑷子、剪刀、剖針；3．雙筒解剖顯微鏡；4．光照培養箱或溫室；

    材料煙草無菌苗、豌豆幼苗。

    試劑

    （1）MS培養基，植物激素：NAA、6-BA等；

    （2）飽和漂液（次氯酸鈉）；

    （3）70%酒精、100%酒精、酒精棉球；

    （4）無菌水

    四．實驗步驟

    豌豆苗的莖尖培養

    ⑴取發芽6天的豌豆幼苗10株，簡取1厘米左右的莖尖，浸入70%的酒精中1分鐘，再浸入飽和次氯酸鈉溶液中消毒15分鐘，（此步以后要求無菌）用無菌水中沖洗5次，在滅菌的濾紙上吸干水分，放入滅菌的培養皿中。

    ⑵在雙目解剖鏡下，用滅菌的解剖針剝去幼葉露出生長錐，用滅菌的解剖針挑取帶著兩至三個葉原基的生長錐。

    ⑶將挑好的莖尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L6-芐基腺嘌呤（6-BA）的培養基上誘導愈傷組織形成，用封口膜將培養皿封好。

    （4）在恒溫培養箱中，26℃下,培養六周，形成愈傷組織，經繼代后，可用于生根培養