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elisa試劑盒操作步驟

來源:上海西唐生物科技有限公司   2011年04月20日 13:41  
  elisa試劑盒操作步驟
       方法一 用于檢測未知抗體的間接法:
  用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,
   每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。
  加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔
  中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)
  于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,
  37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。 
   其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
        elisa試劑盒操作步驟  方法二 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法: 
   1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。 
   2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
  3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
   4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

  5. 終止反應:于各反應孔中加入終止液。 
     6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

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