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國(guó)產(chǎn)電色譜系統(tǒng)可分離蛋白質(zhì)及多肽你知道嗎？
國(guó)產(chǎn)電色譜系統(tǒng)可分離蛋白質(zhì)及多肽你知道嗎？
國(guó)產(chǎn)電色譜系統(tǒng)是一種集毛細(xì)管電泳（HPCE）和液相色譜（HPLC）的分離機(jī)制于一體的方法，它的溶質(zhì)流動(dòng)是通過一個(gè)電驅(qū)動(dòng)原理，分離機(jī)制是不僅依靠溶質(zhì)—固定相間的反應(yīng)作用，還有電滲流的作用。在普通的毛細(xì)管電色譜模式中，毛細(xì)管填充了化學(xué)改性的硅膠顆粒，固定相如同HPLC中一樣。一個(gè)柱塞，置于溶質(zhì)到達(dá)檢測(cè)窗口之前的位置，以用于阻止固定相的流失和光信號(hào)的失真。塞子和固定相顆粒都可能導(dǎo)致氣泡的產(chǎn)生，從而導(dǎo)致電滲流的中斷，為了大限度地減少氣泡產(chǎn)生的可能性和排除堵塞，這在小直徑的管子內(nèi)是很困難的，因此發(fā)展了一種在毛細(xì)管內(nèi)壁蝕刻的毛細(xì)管電色譜方法，這個(gè)過程同在氣相色譜中為了增加毛細(xì)管柱內(nèi)壁表面積而涂上一層聚合物的方法相似，在控制的溫度和反應(yīng)時(shí)間下使用了二氟化氫銨作蝕刻劑。較早的研究描述在300-400℃時(shí)蝕刻毛細(xì)管3-4小時(shí)，這些條件明顯地增加了表面積，從而充分地增大了蛋白質(zhì)、多肽和四環(huán)素與十八烷基固定相間的分配因子（在溶質(zhì)和蝕刻柱內(nèi)壁上的有機(jī)部分之間）。
用有機(jī)物蝕刻毛細(xì)管的方法是以硅烷化—氫化硅烷化反應(yīng)為基礎(chǔ)的，在這個(gè)過程中，毛細(xì)管中被蝕刻過的表面先同三乙氧基甲硅烷反應(yīng)，以產(chǎn)生一個(gè)氫化物表面，在理想的條件下，一單層三乙氧基甲硅烷被沉淀在柱子表面，以致大部分硅烷醇被氫化物取代，然后通過注入一種含有烯烴的溶劑和一種適合的催化劑，如六氯鉑酸，讓其流過毛細(xì)管，有機(jī)成分就立即被附在氫化物上，這個(gè)過程被稱作氫化硅烷化過程，在前面的研究中，被使用的烯烴為1-十八烯烴，硅烷化-氫化硅烷化反應(yīng)方法也被用于毛細(xì)管電泳中未蝕刻的毛細(xì)管柱，以涂附丙烯酰胺聚合物。鍵合方法的一個(gè)好處是在有機(jī)部分和表面間形成了一穩(wěn)定的硅—碳鍵合層。實(shí)驗(yàn)證明聚合丙烯酰胺毛細(xì)管通過氫化物間接鍵合比有機(jī)硅烷化更穩(wěn)定，在這個(gè)研究中，被蝕刻的毛細(xì)管首先被氫化物介質(zhì)鍵合，隨后和7-辛烯基-1，2-二醇(7-OD)或1-十八烯烴反應(yīng)，以產(chǎn)生適合于電色譜的柱子，在HPLC中7-OD鍵合材料已經(jīng)表現(xiàn)出了比二醇基更小的疏水性，以致在用毛細(xì)管電色譜分離混合物產(chǎn)生更適合的特性，在這些混合物中，一個(gè)適合的介于疏水性和親水性間的平衡是*的，例如生物分子。
電色譜過程：二醇基和十八烷基毛細(xì)管柱先進(jìn)行預(yù)處理，由注射泵注入十倍柱體積的緩沖溶劑通過柱子，流動(dòng)相要先經(jīng)過超聲波脫氣處理，然后用氦氣清潔。電動(dòng)進(jìn)樣在5KV電壓下，6秒完畢，所有樣品均在211nm下檢測(cè)。
研究結(jié)果表明關(guān)于在化學(xué)改性蝕刻柱上溶質(zhì)—鍵合相作用的研究，它不同于傳統(tǒng)方法，是電色譜的另一種方式，原因在于它以開口管結(jié)構(gòu)代替了填充柱，實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明了鍵合蝕刻柱同空管柱相比具有明顯不同的保留特性，另外，不同的有機(jī)成分涂附在蝕刻過的表面，分離的能力也會(huì)不同，如同HPLC中依賴不同的化學(xué)鍵合配位體一樣，這種方式的電色譜的另一些基本特性以及各種各樣化學(xué)改性蝕刻柱制作的進(jìn)一步研究正在取得進(jìn)展。
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