ELISA中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結合物和酶的底物等
完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：
1.已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)
2.酶標記的抗原或抗體(結合物)；
3.酶的底物；
4.陰性對照品和陽性對照品(定性測定中)，參考標準品和控制血清(定量測定中)；
5.結合物及標本的稀釋液；
6.洗滌液
7.酶反應終止液。
 ELISA試劑盒操作步驟：
1. 加標準品：在酶標包被板上設標準品孔，依次加入不同濃度的標準品50ul(建議每個濃度做2個平行孔)
2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品40μl，然后再加樣品親和素10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：除空白孔外每孔加入酶標試劑50μl。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。
 11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。