大鼠分泌型免疫球蛋白A（sIgA）ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理及操作步驟

大鼠分泌型免疫球蛋白A（sIgA）ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被大鼠分泌型免疫球蛋白A（sIgA）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠分泌型免疫球蛋白A（sIgA）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

大鼠分泌型免疫球蛋白A（sIgA）ELISA試劑盒操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.  樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值。

大鼠分泌型免疫球蛋白A（sIgA）ELISA試劑盒試劑盒性能

1.  檢測(cè)范圍：1 μg/mL – 32 μg/mL。

2.  靈敏度：低檢測(cè)濃度小于0.1 μg/mL。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.  重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。