對于每一個身經百柱的分離純化研究員來說，液相色譜圖是他們打開未知物質世界的大門，科研中的很多問題都能從色譜圖中得到很好的反映，有些問題可以通過改變設備參數得到解決，而有些問題則必須通過修改操作程序來解決，畢竟，正確選擇色譜柱和流動相才是得到好的色譜圖的關鍵。小編在此根據大家實踐中可能會經常遇到的一些圖譜問題進行了整理匯總，大家一起來看一下吧。

1.拖尾峰

1. 篩板阻塞：柱子兩頭的過濾篩板如果堵塞，樣品就會在篩板部分受阻而形成時間延遲，使得樣品在柱后流出時峰型形成拖尾。需要通過反沖色譜柱，或者更換篩板。

2. 色譜柱塌陷：是指色譜柱由于其它原因引起了柱效率喪失，不能對物質形成保留，使得物質不在固定相上保留而隨流動相流出，但是又還有一點柱效，因此形成拖尾。需要重新填充色譜柱或者更換色譜柱。

3. 有污染：即樣品不在同一起跑線起跑，從后面開始跑得到達終點稍晚，表現出拖尾。更換色譜柱或者采用有機溶劑梯度洗脫1h以上，以沖洗柱子。

4. 流動相PH值選擇錯誤：如某PH下有的樣品存在分子型和離子型的動態平衡，離子型的陸續向分子型轉化就會表現出拖尾。調節PH值可抑制分子解離，改善拖尾，對于堿性化合物，相對較低的PH值更有利于得到對稱峰。

2.前沿峰

1. 樣品過載：被保留的樣品在正常出峰時間前陸續出來，形成前沿峰。降低樣品含量。

2. 樣品溶劑選擇不恰當：當樣品溶劑的洗脫能力大大強于流動相時會出現前沿峰，例如，在反相色譜中用已腈做樣品溶劑，而流動相的洗脫力較弱時會出現前沿峰。選擇流動相或者接近流動相的比例作為樣品溶劑。

3. 色譜柱損壞：色譜柱柱效損失，不能對物質形成保留。更換色譜柱。

4. 在大峰前有小峰出現，假象前沿峰，即大峰前包埋了沒有分開的小峰。調整流動相洗脫梯度。

3.基線漂移

1. 柱溫波動：即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動，通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。使用柱溫箱，控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器。

2. 流動相不均勻：流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導致的漂移。使用HPLC級的溶劑，流動相在使用前進行脫氣處理。

3. 流通池被污染或有氣體：用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。

4. 流動相配比不當或流速變化：更改配比或流速，為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。

5. 樣品中有強保留的物質：以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現出一個逐步升高的基線。使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。

4.出現寬峰

1.色譜柱污染或失效，造成塔板數降低：更換同樣類型的色譜柱，如果新柱子可以提供對稱的色譜峰，則用強溶劑沖洗舊柱子。

2.柱子與檢測器之間的管路太長或管路內徑太大：更換內徑較小的短管路。

3.檢測器對反應時間或池體積響應過大：減少響應時間或使用更小的流通池。

5.基線噪音

1. 在流動相、檢測器或泵中有空氣(尖銳峰)：流動相脫氣，沖洗系統以除去檢測器或泵中的空氣。

2. 漏液：檢查管路接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。

3. 流動相混合不*：用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑。

4. 溫度影響(柱溫過高，檢測器未加熱)：使用柱溫箱，減少溫度差異或加上熱交換器。

5. 在同一條線上有其他電子設備(偶然噪聲)：斷開LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。采用精密級穩壓電源。

6.分離度不夠

1.流動相梯度洗脫設置不合理：優化梯度洗脫程序。

2.流動相污染或變質(引起保留時間變化)：重新配置流動相。

3. 保護柱或分析柱阻塞：去掉保護柱進行分析，如果必要則更換保護柱；如果分析柱阻塞，可進行反沖；如果問題仍然存在色譜柱可能被強保留的污染物損壞，建議使用恰當的再生程序；如果問題仍然存在，進口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。