ELISA小小知識

      如今生物科技日益突飛猛進的時代，像ELISA試劑盒產品五花八門品牌也眾多，讓你目不暇接，那么我們該如何選擇適合于我們科研實驗用的ELISA試劑盒呢？我們來看看ELISA常見技術指南：

   1、選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對；若選擇兩個單抗，必須識別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對。
   2、ELISA實驗中為了確定*佳信號和背景應將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測抗體（0.25-2μg/ml）在預實驗中進行彼此相抗的滴定。同時，應包括在適當范圍內的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規提供的范圍進行操作。
   3、標準品的配制：對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書，注意每批的細節。在使用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細胞因子。根據每批說明書中的細節，將凍干的細胞因子復溶。
   4、一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml。可利用標準的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統可在一定范圍內提高靈敏度。
   5、為了優化靈敏度，建議過夜孵育標準品和標本。
   6、若使用過氧化物酶作為顯色系統，應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
   7、當測定混合液體中的抗原時，如血清，建議在標本稀釋液中加不相干的Ig。
   8、把試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
   9、濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
   10、各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
   11、請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請*后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
   12、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
   13、底物請避光保存。