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安捷倫6550 iFunnel系統同時定性與定量分析丁螺環酮及其代謝物

來源:上海斯邁歐分析儀器有限公司   2019年07月02日 20:18  

及時快速的對代謝穩定性、代謝物鑒定及代謝物組成分析進行評估,對于加快優化先導 物和提高供試藥物開發的成功率是非常關鍵的。帶有多反應監測 (MRM) 的三重四級桿液質聯用儀LC/MS 已經成為定量分析的主力軍,如代謝穩定性和代謝物組成分析研究。然而,該方 法主要用于已知目標物的高靈敏度定量分析,但對于未知目標物的定性分析不是非常適 用。鑒于此原因,通常在不同類型的質譜上單獨進行代謝物的鑒定分析(定性分析)。 由于傳統串聯質譜靈敏度的限制,往往需要相對較高的底物濃度(即 10-20 µM)在較大 范圍內進行代謝物的鑒別。

在一臺儀器上通過一次運行來完成定量與定性鑒別分析 (Qual/Quan),既能顯著提高代 謝穩定性研究、代謝物鑒別及代謝物組成分析研究的效率,又能提高測定效率和降低藥 物研發的成本。本應用報告介紹了定性/定量分析的整體工作流程,以丁螺環酮 (1µM) 在 大鼠肝微粒體中的體外代謝研究為例,驗證了安捷倫 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系統 在代謝穩定性測定,代謝物鑒別和代謝物組成分析研究中的性能。

 

主要特點和優勢

• 6550 iFunnel Q-TOF 能夠在不降低數據 質量和分析速度的前提下,同時完成代 謝穩定性、代謝物鑒別和代謝物組成分 析的定性與定量研究。

• 低至 pg/mL 的高靈敏度實現了在 60 min 內對含有 1µM 丁螺環酮的大鼠肝微粒體 同時進行丁螺環酮及其代謝物的定量和 鑒別。

• MS 和 MS/MS 的亞 ppm 質量精度結 合出色的同位素保真度,能提供可靠的 代謝物鑒定和結構解析結果。

• 利用高 50 張圖譜/秒的快速數據采集 速率可在 3.5 分鐘的運行時間內實現準 確定量分析。

• MassHunter 代謝物 ID 軟件在較寬范圍 進行特征鑒定和 Novatia 自動轉換算法, 極大促進了代謝物的鑒別。

• MassHunter 定量分析軟件可提供快速 的批量數據采集和報告。

 

定性/定量一體化工作流程:定性/定量工作流程開始于生物樣品進樣到 LC/MS 系統(如圖 1 所示)。使用安捷倫 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系統時,數 據采集包括 MS 全掃描及數據依賴的三個 自動 MS/MS 掃描。MassHunter 代謝物 ID 軟件有效的促進了代謝物鑒別和結構解 析。利用 MassHunter 定量分析軟件的批 量模式采集數據并建立數據集,通過該數據 集進行代謝穩定性和代謝物組成分析研究。

定性/定量分析 圖 2 顯示了丁螺環酮的代謝穩定性和其代 謝物組成分析,并具體展示了 60 分鐘內 丁螺環酮廣泛范圍的高豐度及低豐度代謝 產物。

圖 3 顯示了經過 10 分鐘的處理后樣品中丁螺 環酮單羥基代謝物的 MS 和 MS/MS 譜圖。 母離子和碎片離子亞 ppm 的質量精度以及出 色的同位素保真度(總匹配度 >99%),實現了可靠的代謝物鑒別和結構解析。僅 3.5 分 鐘時間即獲得了良好的分離效果和廣泛的代 謝物分析(如圖 4 所示)。

 

結論:利用安捷倫 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 和 兩種功能強大的工具軟件(MassHunter 代謝物 ID 和定量分析軟件)開發了一個 的定性/定量工作流程。安捷倫 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系統可對 1µM 經處 理的丁螺環酮同時進行定量和代謝物鑒定 分析,無論靈敏度還是通量或可信度均表 現。并且只需這一個分析平臺便能快 速開發出 LC/MS 通用方法,而且也不必再 浪費時間為各個分析物進行 MRM 優化。

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