背景描述:
膠原酶(Collagenases),基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)家族的成員之一,屬于內肽酶類,在三螺旋區降解天然膠原,參與結蹄組織的生理和病理周轉過程。膠原是動物基質結蹄組織的主要纖維成分。膠原酶可能在腫瘤細胞轉移的多個階段中,對腫瘤細胞侵襲穿透細胞外基質的過程起到促進作用。膠原酶已被支持用于臨床治療杜普征氏掌攣縮(Dupuytren's contracture),佩羅尼氏病(Peyronie's disease)和傷口愈合。
膠原酶活性檢測方法很多,傳統的方法包括膠原酶譜法(Collagen Zymography),該法首先將樣本加入含膠原的SDS-PAGE凝膠中電泳,然后在適當緩沖液中復性12-16h,后染色。當底物被酶降解,在整個黑色的背景中能看到清晰透明的降解條帶,從而來判斷是否存在膠原酶活性。該方法不僅費力費時,且很可能因復性不*逆轉,導致酶活性降低,結果出現較大偏差。
Rapid Collagenase Assay Kit (I) and (II)(Chondrex, Inc)
1. 試劑盒優勢
含有測定膠原酶活性的所有必要成分包括重組人MMP-8(用作對照)和兩種類型的膠原酶活化劑。
不同于抗體為基礎的ELISA試劑盒僅能檢測酶蛋白的存在,這些試劑盒目的在于測定酶活性。
試劑盒使用FITC標記的可溶性牛I型膠原或II型膠原為底物,只需2h就能完成測試。
比底物凝膠分析法(酶譜法)快10倍,檢測靈敏度比放射同位素標記膠原法更靈敏。
2. 特異性
哺乳動物膠原酶
1.3 工作原理
哺乳動物膠原酶切割膠原分子上的所有三個α鏈,產生3/4和1/4大小的膠原片段,TCA和TCB,這兩個片段的變性溫度分別為34-35℃和28-29℃,而所有完整膠原(天然膠原)的變性溫度是40℃。因此,35℃下這些切割片段能選擇性變性為隨機的螺旋構象,能夠被一種有機溶劑提取出來。為了縮短變性過程(通常需60min),一種蛋白酶被引入用來進一步消化膠原酶降解后的產物。
1.4 反應步驟
1.5 試劑盒訂購
貨號 | 名稱 | 規格 |
3014 | Bacterial Collagenase Assay Kit | 100 assays |
3001 | Rapid Collagenase Assay Kit with Type I Collagen Substrate | 100 assays |
3002 | Rapid Collagenase Assay Kit with Type II Collagen Substrate | 100 assays |
3003 | MMP-13 Inhibitor Assay Kit | 100 assays |
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