產品及特點

本試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有鹿的成分。現代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質地等特性，因此傳統的感官鑒別技術已經無法對食材的真偽進行準確的鑒定。同時部分食材還有致敏性，因此基于基因檢測的快速靈敏的食材來源檢測技術將對食品監管和安全提供重要的保障。本產品就是為滿足這一需求根據PCR原理開發的產品，它具有下列特點：

• 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA。
• 根據鹿保守區域設計引物，能專一性地檢測出樣品中的鹿成分，包括馬鹿、梅花鹿、坡鹿、水鹿和白唇鹿，但不能檢測其他動物成分。
• 熒光定量PCR檢測，既可以定量，也可以定性，比常規PCR更加靈敏和靈活。
• 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為2.0小時。
• 一管式閉管操作，降低了交叉污染。
• 提供陽性標準品，便于分析實驗結果。
• 對混合樣品中鹿成分的檢測下限為0.1%，對樣品中鹿成分的核酸檢測下限為 1.0ng/µL。
• 本只能用于科研，足夠50次20μL體系的熒光定量PCR。
• 本產品參考國家標準GB/T21106-2007制備。

規格及成分

運輸及保存

低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區域操作。

自備試劑

DNA模板

使用方法

一、稀釋標準曲線樣品（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供動物樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。

• 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
• 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
• 在7號管中加入5 μL陽性對照（濃度為1×10E8拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
• 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
• 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
• 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

• 用自選方法純化樣品的DNA，本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
• 如果有N個樣品，則需要進行N+2個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。如果用本試劑盒自帶的天凈沙核酸釋放劑試用裝，則登陸公司網站輸入產品名稱天凈沙核酸釋放劑或產品編號61202下載。

三、設置qPCR反應（20μL體系，在樣品制備室進行）

• 如果做定量分析并且只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做1次重復，則標記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于PCR陽性對照（用第4號陽性對照稀釋液，濃度為10000拷貝/μL）。下面只描述定量分析的步驟，定性分析只是把6個標曲反應縮減成1個，其余不變。
• 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加）：

注:僅ABI7500、7700和7900儀器需要使用ROX作為對照，其他熒光PCR儀器（如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000和LightCycler480）不需要使用ROX，則用水替代。

• 蓋上蓋子后上機，按下面參數進行qPCR（具體PCR參數可以根據qPCR儀器的不同而自行優化）。

四、qPCR反應參數

五、數據處理

• 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
• 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照Ct必須大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct值應該小于或等于30。對待測樣品，如果其Ct大于或等于40則為陰性，如果小于或等于35則為陽性。如果在35-40之間，則重復一次。重復實驗的Ct值如果大于或等于40則為陰性，如果小于40，則為陽性。

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