上海研域不僅從事酶聯免疫試劑盒的研究與開發，我司對免疫組化也涉及其中，并且多次試驗，累計了很多今年經驗，我司就技術文章中為大家具體解析ELISA實驗中染色問題分析及解決辦法總結，歡迎閱讀賞析。

問題一：染色過強
原因及相關解決方法：

a 抗體濃度過高或孵育時間過長 降低抗體滴度、抗體孵育時間：室溫1小時或4度過一夜

b 孵育溫度過高超過37度 一般在室溫20-28度

c DAB顯色時間過長或濃度過高 顯色時間不超過5-12分鐘，以顯微鏡下觀察為準 

問題二：非特異性背景染色
原因及相關解決方法：

a 操作過程中沖洗不充分： 每步沖洗3次每次5分鐘

b 組織中含過氧化物酶未阻斷 ：可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時間延長

c 組織中含內原性生物素：正常非免疫動物血清再封閉

d 血清蛋白封閉不充分：延長血清蛋白封閉時間

問題三：”染色弱
原因及相關解決方法 ：

a 抗體濃度過低、孵育時間過短：提高抗體濃度、孵育時間不能少 于60分鐘

b 試劑超過有效使用時間： 應更換試劑

c 操作中添加試劑時緩沖液未瀝干 ：每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液
使試劑稀釋 （應防止切片干燥）

d 室溫太低 ：低于15度要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4 度冰箱過一夜

e 蛋白封閉過度：封閉不要超過12分鐘

問題四：染色陰性
原因及相關解決方法 

a 操作步驟錯誤：應重試設陽性對照

b 組織中無抗原：設陽性對照以驗證試驗結果

c 一抗與二抗種屬連接錯誤：仔細確定一抗二抗種屬無誤

  上海研域在elisa試劑盒檢測中發揮的，其可靠性、靈敏度、重復性、特異性保證實驗結果的曲線，贏得客戶的多次購買，以往客戶回饋中發現，客戶對質量要求高，接近，根據客戶要求，在2019年將持續以更的產品，更低廉的價格回饋新老客戶對我司的大力支持。