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人多肽YY(Peptide-YY)ELISA試劑盒使用說明書

來源:上海琛藝實業有限公司   2019年09月06日 10:45  

國產elisa試劑盒價格,物美價廉,量大從優,部分ELISA試劑盒*銷售。

上海琛藝實業有限公司涉足新的生物領域ELISA試劑盒,ELISA試劑盒研發的種屬涵蓋:人,大鼠,小鼠,豬,牛,羊,兔,植物,農殘類,魚類等。

人多肽YY(Peptide-YY)ELISA試劑盒使用說明書

一.實驗目的
     酶聯免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay 簡稱ELISA)是在免疫酶技術(immunoenzymatic techniques)的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術,ELISA過程包括抗原(抗體)吸附在固相載體上稱為包被,加待測抗體(抗原), 再加相應酶標記抗體(抗原),生成抗原(抗體)--待測抗體(抗原)--酶標記抗體的復合物,再與該酶的底物反應生成有色產物。借助分光光度計的光吸收計算抗體(抗原)的量。待測抗體(抗原)的定量與有色產生成正比。

雙抗體夾心法測抗原

雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法,操作步驟如下:
1) 將特異性抗體與固相載體聯結,形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。
2) 加受檢標本,保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合,形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結合物質。
3) 加酶標抗體,保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。
4) 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產物。通過比色,測知標本中抗原的量。在臨床檢驗中,此法適用于檢驗各種蛋白質等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體,就可用于包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清,包被和酶標用的抗體分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體,一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,分別用于包被固相載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應,作一步檢測。
在一步法測定中,當標本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合,而不再形成"夾心復合物"。類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現象,此時反應后顯色的吸光值(位于抗原過剩帶上)與標準曲線(位于抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同(參見1.3.2,圖1-4),如按常法測讀,所得結果將低于實際的含量,這種現象被稱為鉤狀效應(hook effect),因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時,反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)時,應注意可測范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。
假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇,例如HBsAg的a決定簇,也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型,雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性,這也是用單抗作夾心法應注意的問題。
雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子(RF)的干擾。RF是一種自身抗體,多為IgM型,能和多種動物IgG的Fc段結合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF,它可充當抗原成份,同時與固相抗體和酶標抗體結合,表現出假陽性反應。采用F(ab')或Fab片段作酶結合物的試劑,由于去除了Fc段,從而消除RF的干擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響,已被列為這類試劑的一項考核指標。
雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原,但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原,因其不能形成兩位點夾心。

樣品要求

·客戶需提供待檢測抗體和包被用抗原。

·檢測的樣本為細胞培養上清、人和動物的血清、血漿。

·樣本收集后應立即-20℃保存,若長期保存應-70℃。

·樣本量的要求:若一個指標做復孔檢測應不少于250ul,做單孔檢測應不少于120ul。建 議若客戶樣本量充足提供500ul以上。

·客戶的樣本收集后,立即按要求保存,切忌反復凍融。外地客戶郵寄需要用干冰運輸。郵寄前請與溝通確認。

什么叫著ELISA試劑盒:

ELISA試劑盒在國內有許多種叫法,例如:ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯免疫試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒、酶聯免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒等。 ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來,得到*科研工作者的認可及推崇,在歐美及中國獲得很大的推廣,尤其是國內生化領域的長足發展。 Elisa生物試驗是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測。

 

人多肽YY(Peptide-YY)ELISA試劑盒使用說明書參數規格

【供貨期】:1-3天(現貨供應)

【產品用途】:被測樣品定性定量分析

【產品規格】:96T/48T(兩種規格)

【檢測方法】:酶免法/酶聯免疫法(ELISA)

【保存條件】:2-8℃

人ELISA試劑盒能夠采用的方法如下:

方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法

  1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。

  2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

  3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。

  4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

  5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

  6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

 

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