1．培養的細胞（定性）：

    (1)去培養液后用溫的PBS沖洗2~3遍（冷的PBS有可能使細胞脫落）。

    (2)對于6孔板來說每孔加200~300μl，60~80℃的1×loadingbuffer。

    (3)100℃，1min。

    (4)用細胞刮刮下細胞后在EP管中煮沸10min，期間vortex2~3次。

    (5)用干凈的針尖挑絲，如有團塊則將團塊棄掉，如果沒有團塊但有拉絲現象，則可以將EP管置于

0℃后在14000~16000g離心2min，再次挑絲。若無團塊也無絲狀物但溶液有些粘稠，可通過使用1ml注射

器反復抽吸來降低溶液粘滯度，便于上樣。

    (6)待樣品恢復到室溫后上樣。

    2．培養的細胞（定量）：

    (1)去培養液后用溫的PBS沖洗2~3遍（冷的PBS有可能使細胞脫落）。

    (2)加入適量的冰預冷的裂解液后置于冰上10~20min。

    (3)用細胞刮刮下細胞，收集在EP管后超聲（100~200w）3s，2次。

    (4)12000g離心，4℃，2min。

    (5)取少量上清進行定量。

    (6)將所有蛋白樣品調至等濃度，充分混合沉淀后加loadingbuffer后直接上樣，剩余溶液（溶

于1×loadingbuffer）可以低溫儲存，-70℃一個月，-20℃一周，4℃1~2天，每次上樣前98℃，3min。

    3．組織：

    (1)勻漿對于心肝脾腎等組織可每50~100mg加1ml裂解液，肺100~200mg加1ml裂解液。可手動或電動

勻漿。注意盡量保持低溫，快速勻漿。

    (2)12000g離心，4℃，2min。

    (3)取少量上清進行定量。

    (4)將所有蛋白樣品調至等濃度，充分混合沉淀加loadingbuffer后直接上樣，剩余溶液（溶于

1×loadingbuffer）可以低溫儲存，-70℃一個月，-20℃一周，4℃1~2天，每次上樣前98℃，3min。