鏈霉素ELISA檢測試劑盒樣本前處理以及注意事項

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知：

實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實驗結果。

5.2 配液：

配液1：0.05M  PB緩沖液

    稱取12.9g Na₂HPO₄·12H₂O和2.175g NaH₂PO₄·2H₂O加去離子水1000ml溶解。

配液2：0.04M磷酸（蜂蜜樣品）

    1ml濃磷酸加去離子水定溶至360ml。

配液3：1M NaOH（蜂蜜樣品）

    稱取4g NaOH加去離子水定溶至100ml。

配液4：復溶液

    將5×復溶液用去離子水5倍稀釋，用于樣本的復溶，復溶液在4℃環境可保存一個月。

5.3 樣本前處理步驟：

5.3.1 組織樣本

1）稱取2±0.05g去除脂肪的勻漿樣品，加入8ml 0.05M PB緩沖液，振蕩5min，置56℃水浴環境放置30min；

2）室溫4000r/min以上離心10min；

3）取1ml上清液加入1ml正己烷，充分混勻，室溫4000r/min以上離心5min；

4）去除上層有機相，取50ul下層液，加入450ul 稀釋后的復溶液，混合30s；

5）取50ul用于分析。

    樣本稀釋倍數：40     檢測下限：4ppb

5.3.2 蜂蜜、蜂王漿

1）稱取2±0.05g 樣品，加入4ml 0.04M磷酸，振蕩至*溶解，室溫4000r/min以上離心5min，直至清亮。（蜂蜜樣品可不用離心直接進行第2步）；

2）加入450ul 1M NaOH將PH值調至7-9之間(蜂王漿樣品需將全部上清移至另一干凈離心管中調節PH值至7-9之間)，室溫4000r/min以上離心5min ，直至清亮；

3）取50ul上清液，加入450ul稀釋后的復溶液混勻，混合30s；

4）取50ul用于分析。

    樣本稀釋倍數：20     檢測下限：2ppb

5.3.3 牛奶、奶粉

1）稱取2±0.05g樣品，加入8ml 0.05M PB緩沖液，振蕩5min，置56℃水浴環境放置30min；

2）室溫4000r/min以上離心10min；

3）去除上層脂肪，取50ul中層澄清液體，加入450ul 稀釋后的復溶液，混合30s；

5）取50ul用于分析。

    樣本稀釋倍數：50     檢測下限：5ppb

6 注意事項

6.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫（25℃）會導致所有標準的OD值偏低。

6.2 在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。

6.3 混合要均勻，洗板要*，在ELISA分析中的再現性，很大程度上取決于洗板的一致性。

6.4 在所有孵育過程中，用蓋板膜封住微孔板，避免光線照射。

6.5 不要使用過了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

6.6 顯色液若有任何顏色表明變質，應當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質。

6.7 反應終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚。