環(huán)丙沙星ELISA檢測(cè)試劑盒樣本前處理及各大類樣本處理方法分析

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知：

實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

5.2 配液：

配液1：0.15M鹽酸溶液

    取5ml濃鹽酸，加入去離子水中定容到400ml。

配液2：樣本提取液

    量取10ml 0.15M鹽酸溶液（配液1）加入到90ml無水乙腈中混合均勻。

配液3：復(fù)溶液

    將5×復(fù)溶液用去離子水5倍稀釋，用于樣本的復(fù)溶，復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月。

5.3 樣本前處理步驟：

5.3.1 動(dòng)物組織（雞肉、豬肉、魚、蝦）處理方法

1）稱2.0±0.05g 均質(zhì)過的組織樣本于50ml離心管中；

2）加入8ml樣本提取液（配液2），振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

3）取2ml清澈上層有機(jī)相至潔凈干燥的10ml玻璃試管中，50-60℃水浴氮?dú)獯蹈桑?/span>

4）加入1ml正己烷，振蕩2分鐘，再加1ml復(fù)溶液（配液3），振蕩30秒，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘；

5）去除上層正己烷，取下層水相50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數(shù)：2    檢測(cè)下限：0.3ppb

5.3.2 蜂蜜處理方法

1）取1.0±0.05g蜂蜜至50ml聚苯乙烯離心管中，加6ml樣本提取液（配液2），振蕩5分鐘，使其充分溶解；

2）加入3ml復(fù)溶液（配液3），加入11ml二氯甲烷，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘；

3）吸去上層，取下層有機(jī)相8ml至干燥溶器中，50-60℃水浴氮?dú)獯蹈桑?/span>

4）用1ml復(fù)溶液溶解干燥的殘留物，再加入正己烷1ml混合30秒，室溫3000轉(zhuǎn)/分以上，離心5分鐘；

5）去除上層取下層50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數(shù)：2    檢測(cè)下限：0.4ppb

5.3.3 牛奶處理方法：

1）取25µl樣本液與475µl復(fù)溶液（配液3）混合，振蕩1分鐘，使其充分溶解；

2）取50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數(shù)：20    檢測(cè)下限：3ppb

5.3.4 奶粉處理方法：

1）稱取0.5±0.02g均質(zhì)物至10ml聚苯乙烯離心管中，加入5ml去離子水，振蕩，使其充分溶解；

2）取100µl樣本液與400µl復(fù)溶液（配液3）混合，振蕩1分鐘；

3）取50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數(shù)：50    檢測(cè)下限：6ppb

5.3.5 雞蛋處理方法：

1）稱取1.0±0.02g均質(zhì)物至10ml聚苯乙烯離心管中，加入5ml去離子水，振蕩，使其充分溶解；

2）取100µl樣本液與400µl復(fù)溶液（配液3）混合，振蕩1分鐘；

3）取50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數(shù)：30    檢測(cè)下限：3ppb