產品及特點

乙型肝炎病毒（HBV）共價閉合環(huán)狀 DNA（covalently closed circular DNA，cccDNA）是乙肝病毒前基因組 RNA 復制的原始模板，雖含量較少，每個肝細胞內只有約 5-50 個拷貝，但對乙肝病毒的復制以及感染狀態(tài)的建立具有十分重要的意義，只有清除了 cccDNA，才能*消除乙肝患者病毒攜帶狀態(tài)。因此 cccDNA 的檢測具有重要的臨床意義。本產品是基于常規(guī) PCR 技術的乙肝病毒cccDNA 快速檢測試劑盒。它具有下列特點：

• 即開即用，用戶只需要提供病毒 DNA 模板。
• 引物經過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增乙肝炎病毒cccDNA。
• 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
• PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
• 本試劑盒足夠做 40μL 體系的PCR 50 次。
• 本產品只能用于科研。

規(guī)格及成分

成 份

編號

十孔盒包裝

PCR MagicMix 3.0

90805

1 mL（紅蓋）

超純水

100935

1 mL（亮黃蓋）

乙型肝炎病毒cccDNA PCR

引物混合液

13-10000yw

100 μL（白蓋）

乙型肝炎病毒cccDNA PCR 陽性對照

（1×10E8 拷貝/μL）

13-10000pc

50 μL（黃蓋）

天凈沙核酸釋放劑(試用裝)

61202

20 次（1mL、綠蓋）

使用手冊

13-10000sc

1 份

運輸及保存

低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其

他試劑。

自備試劑

樣品 DNA。

使用方法

一、樣品DNA 的制備

• 如果有N 個樣品，必須設置N+2 個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 陽性對照的 100 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為 NC。
• 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的病毒 DNAout 或柱式病毒 DNAout。本試劑盒免費贈送 50 次免 DNA 提取的天凈沙 DNA 釋放劑，本產品的裂解液

可以直接作為PCR 模板，省略了 DNA 提取步驟。

二、設置PCR 反應（40 μL 體系）

3. 對 N+2 個樣品，在PCR 時需要增加一個PCR 陽性對照和一個PCR 陰性對照，故需要設置N+4 個反應。在N+4 個PCR 管中分別加入下列成分：

成分 N+2 個 PCR 陰性 PCR 陽性

樣品管 對照管 對照管

PCR MagicMix 3.0 各 20 μL       20 μL 20 μL

乙肝炎病毒 cccDNA PCR

各 2 μL 2 μL 2 μL

引物混合液

N+2 個樣品 DNA 模板 各 18 μL - -

PCR 陰性對照（超純水） - 18 μL -

PCR 陽性對照（乙肝炎病毒

cccDNA PCR 陽性對照的 - - 18 μL 100 倍稀釋液）

4. 按下表設置PCR 反應：

三、電泳檢測

• 取 10-20 μL PCR 產物。電泳檢測 PCR 產物。本產品提供的 PCR Mix 在擴增結束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。預期的PCR 產物長度為  334bp。陽性對照必須有此條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實驗無效。對沒有擴增產物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR

擴增以排除PCR 抑制劑的感染。

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