金剛烷胺檢測試劑盒樣本前處理及實驗步驟

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知：

實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實驗結果。

5.2 配液：

配液1：復溶液

    將2×復溶液V去離子水:V復溶液=1:1稀釋，用于樣本的復溶，復溶液在4℃環境可保存一個月。

5.3 樣本前處理步驟：

5.3.1 組織樣本處理方法：

1）稱取均質后的組織樣本3±0.05g，加入6ml乙腈、1g無水硫酸鈉，充分振蕩3min，室溫4000r/min以上離心10min。

2）取上清液2ml在50-60℃條件下氮氣或空氣流吹至*干燥。

3）加入0.5ml 復溶液、0.5ml正己烷混合振蕩30s于4000r/min以上離心5min，除去上層，取下層液體100µl進行分析。

樣本稀釋倍數：0.5    檢測下限：0.5ppb

6 酶聯免疫試驗步驟

    將所需試劑從4℃冷藏環境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結晶需恢復到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

實驗開始前，用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。

6.1 編    號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

6.2 加樣反應：加標準品或樣本100µl/孔到各自的微孔中，然后加抗體工作液50µl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光反應30分鐘。

6.3 洗    滌：將孔內液體甩干，用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒，后用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

6.4 加酶反應：加酶標記物100µl/孔，25℃避光反應30分鐘。

6.5 洗    滌：同上

6.6 顯    色：加底物液A 50µl/孔，再加底物液B 50µl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘。

6.7 終    止：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，終止反應。

6.8 測吸光值：用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）。測定應在終止反應后10分鐘內完成。