·         產(chǎn)品名稱：Walker/LLC-WRC 256大鼠腹水癌細(xì)胞 含STR

·         細(xì)胞數(shù)量： 1*10^6

·         細(xì)胞來源： atcc

·         組織來源： 胸主動脈平滑肌

·         細(xì)胞種屬： 大鼠源

·         生長特性： 貼壁

·         培養(yǎng)基： DMEM+10%FBS

·         形態(tài)特征： 成纖維細(xì)胞

·         傳代方法： 1:2 - 1:3

·         培養(yǎng)條件： 胎牛血清至終濃度為10％。環(huán)境：空氣，95％;二氧化碳（CO2），5％；溫度，37℃

Walker/LLC-WRC 256大鼠腹水癌細(xì)胞 含STR-細(xì)胞操作說明
請仔細(xì)閱讀本操作說明及相應(yīng)的細(xì)胞說明書。
一、 收貨
<1>本公司細(xì)胞發(fā)貨有四種形式：T25瓶、離心管、血清及干冰。
① T25是用T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶直接發(fā)貨的形式。收到細(xì)胞后，拆開包裝T25瓶的自封袋，不拆封口膜，表面噴75%酒精消毒后顯微鏡觀察細(xì)胞狀態(tài)（有條件可以拍下此時細(xì)胞照片）。將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱平衡兩小時以上，再處理細(xì)胞。首先將T25中培養(yǎng)基取出裝好備用，如細(xì)胞密度高于80%，可以直接消化傳代，相反則加入5-6mL培養(yǎng)基放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)即可。
② 離心管是用15mL離心管發(fā)貨的方式，只用于懸浮細(xì)胞發(fā)貨。收到細(xì)胞后消毒處理及平衡參考上述T25瓶。平衡完成后，離心（1000rpm，3min）收集細(xì)胞，棄上清，用新的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并接種至培養(yǎng)瓶或皿中，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
③ 血清是用牛血清直接發(fā)貨的形式，是細(xì)胞凍存管加入含有細(xì)胞的牛血清的形式。收到細(xì)胞后，拆開自封袋，凍存管表面噴75%酒精消毒后，在超凈臺中打開凍存管，將細(xì)胞用1mL槍頭輕輕幾次以將細(xì)胞吹勻，接種至含有預(yù)熱的培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶或皿中，顯微鏡下觀察細(xì)胞是否吹勻，如果沒有吹勻，繼續(xù)吹勻至3-5個細(xì)胞一團(tuán)，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
④ 干冰是用本公司凍存液凍存細(xì)胞后，直接用干冰將凍存的細(xì)胞冷凍發(fā)貨的形式。收到細(xì)胞后按照細(xì)胞復(fù)蘇的步驟操作即可。
<2>相關(guān)問題
① 如不能在收到細(xì)胞后及時操作細(xì)胞，T25及離心管發(fā)貨的細(xì)胞可以消毒后在37度過夜，血清發(fā)貨的細(xì)胞可以在室溫下靜置1-2天（注意不要放冰箱），干冰發(fā)貨的可以在確認(rèn)干冰未*升華時將細(xì)胞直接放回液氮或者-80度冰箱，若干冰*升華，請即刻復(fù)蘇細(xì)胞。
② T25瓶及離心管在培養(yǎng)箱平衡是為了讓細(xì)胞盡快適應(yīng)培養(yǎng)箱環(huán)境，同時使部分因運(yùn)輸導(dǎo)致脫落的細(xì)胞貼壁，此步驟非常必要。T25瓶如果在顯微鏡下可以看到部分不貼壁的細(xì)胞，可以收集上清后離心（1200rpm，5min）后，將沉淀用新的培養(yǎng)基重懸后接種至新的培養(yǎng)瓶或皿中。
③ 部分細(xì)胞在運(yùn)輸過程中，由于不斷震蕩及環(huán)境不適，可能導(dǎo)致細(xì)胞破碎死亡，從而使培養(yǎng)基中漂浮很多細(xì)胞碎片及顆粒狀物質(zhì)。這種情況下，平衡后，貼壁細(xì)胞用PBS洗兩遍在加新的培養(yǎng)基培養(yǎng)或者傳代至新瓶中培養(yǎng)即可；懸浮細(xì)胞可以離心（1000rpm，3min）收集細(xì)胞，并用PBS重懸后再離心一次，再用新的培養(yǎng)基重懸并接種細(xì)胞。
二、 細(xì)胞培養(yǎng)及傳代
<1>細(xì)胞培養(yǎng)
① 細(xì)胞請于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，大部分細(xì)胞是37℃，5% CO2，濕度100%環(huán)境下培養(yǎng)的。有極少部分細(xì)胞培養(yǎng)條件不一致，請仔細(xì)閱讀相應(yīng)的細(xì)胞說明書，使用正確的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件；
② 細(xì)胞于培養(yǎng)瓶或皿中培養(yǎng)，加入適量說明書上標(biāo)注的細(xì)胞相應(yīng)*培養(yǎng)基（一般液面高度2-3mm即可）。
<2>細(xì)胞傳代（以下步驟適用于10cm皿）
① 細(xì)胞培養(yǎng)至密度達(dá)80%以上時即可傳代，先將細(xì)胞培養(yǎng)基取出3mL用15mL離心管裝好，其他培養(yǎng)基全部吸干舍棄；
② 培養(yǎng)皿加入2-3mL無菌PBS，輕輕晃動皿，使PBS浸洗到皿底所有部位，PBS吸干舍棄；
③ 加入1mL胰酶，輕輕晃動皿，使胰酶浸沒到皿底所有部位，將皿蓋好放入培養(yǎng)箱中消化；
④ 3min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞不再貼壁，即可加入di一步收集的培養(yǎng)基混勻；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至不貼壁為止；
⑤ 將細(xì)胞懸液均勻分成幾份，分別加入不同培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
<3>相關(guān)問題
① 部分細(xì)胞在傳代后時，會有以下現(xiàn)象：細(xì)胞內(nèi)會有黑色小點(diǎn)、細(xì)胞間隙有些顆粒物、培養(yǎng)基漂浮一些死細(xì)胞或者細(xì)胞長的極慢。出現(xiàn)以上現(xiàn)象時，可以咨詢本公司技術(shù)人員此現(xiàn)象是否正常及相關(guān)處理方式，不要頻繁換液，大多數(shù)細(xì)胞1周換液2-3次即可。
② 細(xì)胞碎片較多、背景較臟時，貼壁細(xì)胞用PBS漂洗兩次、懸浮細(xì)胞打散后低速離心（900rpm，3min）能有效改善。
③ 傳代比例建議1:2-1:3，長得比較快的細(xì)胞可以1：3，比較慢的按1:2傳代。傳代后，建議不要使用傳代前培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基，會有大量細(xì)胞碎片甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡的風(fēng)險。
④ 細(xì)胞狀態(tài)不好或者生長極慢的時候，可以通過增加血清濃度調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)及生長速度。
⑤ 請不要隨意更換培養(yǎng)基，因?qū)嶒?yàn)需要，可以逐步馴化。
懸浮傳代：混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液900-1000rpm離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細(xì)胞，再離心后，用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗一次。