產(chǎn)品名稱:Hs888Lu人肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)說明書
規(guī)格:70%密度的25cm2培養(yǎng)瓶的細(xì)胞一瓶
包裝:內(nèi)層無菌自封袋;防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說明書
細(xì)胞來源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:1-2周
運(yùn)輸方式:快遞運(yùn)輸
售后:收到細(xì)胞后12天,如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問題(如污染,死亡,快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí),應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報(bào)告并及時(shí)通知銷售人員,我們將盡快為您解決!
- Hs888Lu人肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)說明書
- 三、細(xì)胞生長條件:
培養(yǎng)條件:
| *培養(yǎng)基:90%RPMI-1640+10%胎牛血清+0.1ug/ml FU GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。 培養(yǎng)條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5% | |
傳代方法:
| 收到細(xì)胞后,在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況。 (一)如果細(xì)胞未長滿,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,低速離心,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液(注意不要吸出細(xì)胞),換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。 (二)如果細(xì)胞已長滿,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下: 1. 低速離心,棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。 2. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加*培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出一半,分到新的培養(yǎng)瓶中(補(bǔ)加*培養(yǎng)基至8到10ml)。如果沒有特別說明,收到細(xì)胞后的第yi次傳代一般是一傳二。 注:1、觀察細(xì)胞在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行,否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X或20X物鏡下。 2、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請(qǐng)換用加雙抗的新培養(yǎng)基,細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。 3、有些細(xì)胞貼壁不牢,如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶?jī)?nèi)。 4、收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。 | |
凍存方法: | 凍存液:90%胎牛血清,10%DMSO 儲(chǔ)存:液氮儲(chǔ)存 | |
做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的同學(xué)看過來。
選擇上海琛藝生物細(xì)胞有3個(gè)理由:
1、細(xì)胞狀態(tài)好,形態(tài)佳,易成活,是市面上比較好養(yǎng)的細(xì)胞之一;
2、物流迅速,復(fù)蘇好后發(fā)貨,次日就能到;
3、使用我司推薦的進(jìn)口品牌血清進(jìn)行培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),效果更佳。
三、 細(xì)胞凍存
<1>凍存操作
① 凍存液配方:建議使用92%FBS+8%DMSO,客戶自身實(shí)驗(yàn)室所使用的凍存液也可以適用,血清濃度不低于30%,DMSO含量不高于12%即可。
② 收集細(xì)胞按照以上細(xì)胞傳代步驟操作至第④步后,將細(xì)胞懸液收集入15mL離心管,離心(1200rpm,3min);
③ 棄上清,加入配制好的凍存液,重懸細(xì)胞,懸液加入無菌凍存管中;
④ 將凍存管在4℃靜置10min,后將之正置于室溫下的厚壁有蓋泡沫盒中,蓋緊盒蓋,放入-80℃冰箱過夜,第二天放入液氮即可長期保存。
<2>相關(guān)問題
① 10cm皿的細(xì)胞長滿一般可以凍存2-3管,部分細(xì)胞長的比較慢,凍存的細(xì)胞密度要稍微大點(diǎn),以防止復(fù)蘇后生長困難。
② 凍存液中含的DMSO請(qǐng)使用細(xì)胞級(jí)DMSO,同時(shí)濃度不要太高。部分細(xì)胞在10%DMSO條件下凍存會(huì)死亡,所以DMSO濃度5%-8%是比較推薦的濃度。
③ 細(xì)胞凍存及復(fù)蘇遵循慢凍快融的原則,即凍存時(shí)溫度不能急劇下降,應(yīng)控制溫度緩慢下降。復(fù)蘇時(shí)應(yīng)快速融化,融化后盡快加入培養(yǎng)基中。
④ 凍存時(shí)建議設(shè)置凍存檢測(cè),即取0.2-0.3mL的凍存液重懸的細(xì)胞于一個(gè)凍存管中,與正常體積凍存的細(xì)胞共同凍存,至液氮后復(fù)蘇檢查凍存結(jié)果。凍檢合格前,留一部分細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng),以防萬一。
四、 細(xì)胞復(fù)蘇
<1>復(fù)蘇步驟
① 將凍存細(xì)胞從液氮中取出后迅速放入37℃溫水中搖晃融化,時(shí)間1min左右;
② 于1000rpm離心1min,棄凍存液,加入1mL新的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞;
③ 接種至新培養(yǎng)瓶或皿中,補(bǔ)加足量*培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
<2>相關(guān)問題
① 復(fù)蘇過程應(yīng)迅速操作,時(shí)間不能太長。
② 復(fù)蘇過程中注意污染,小心操作。
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