細胞名稱:NCI-H157細胞|NCI-H157人非小細胞肺腺癌細胞 含STR
生長特性 貼壁生長
形態特性 上皮樣
產品規格 1×10^6 cells/瓶
培養條件 MEM+10%FBS+1%P/S
生長條件 氣相:5%CO2 95% 空氣 溫度:37 ℃
凍存條件 90%FBS+10%DMSO
背景資料 初認為這個細胞源自喉上皮癌,但隨后通過同功酶分析、HeLa標記染色體和DNA指紋分析發現,起源細胞已被HeLa污染。 角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。
NCI-H157細胞|NCI-H157人非小細胞肺腺癌細胞 含STR常規說明:
凍存液成分:10%DMSO+40%FBS+50%基礎培養液
細胞質檢情況:不含細菌、真菌、支原體等微生物污染
傳代建議:1:2~1:3傳代,2~3天換液1次
特別提醒:簽收細胞后,如細胞狀態不佳,或培養中遇到問題,煩請當天盡快聯系,以便處理。當天及時反饋細胞情況和細胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據,請務必重視。
一、 細胞復蘇
1. 把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
2. 把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中(用培養基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來),1000轉離心5分鐘。
3. 把上清液倒掉,加1ml培養基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前后左右輕輕搖動,使培養皿中的細胞均勻分布。
4. 標好細胞種類和日期、培養人名字等,放到CO2培養箱中培養,細胞貼壁后換培養基。
5. 3天換一次培養基。
二、Hs888Lu人肺成纖維細胞
1. 培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。
2. 把原有培養基吸掉。
3. 加適當的胰蛋白酶(能覆蓋細胞就行),消化1-2分鐘。
4. 細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養基終止消化。
5. 用移液槍吹打細胞,把細胞都懸浮起來。
6. 把細胞吸到15ml的離心管中,1000轉離心5分鐘。
7. 倒掉上清液,加1-2ml培養基,把細胞都吹起來。
8. 根據細胞種類把細胞傳到幾個培養皿中。一般,癌細胞分5個,正常細胞傳3個。繼續培養。
三、細胞凍存
把細胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫明細胞種類,凍存日期。4℃ 30min,-20℃ 30min,-80℃過夜,然后放到液氮灌中保存。
凍存液的配制: 70%的*培養基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。
要注意的就是無菌操作!
細胞在能量儲存和代謝過程中有著重要的作用。
脂肪細胞分化是一個發展的過程,它對代謝穩態和營養信號很重要。
它由復雜的過程控制,如基因表達和信號轉導。
前脂肪細胞存在于成人脂肪組織中,能根據能量的平衡增殖和分化成熟的脂肪細胞。
前體細胞的增殖和分化能夠增加脂肪組織的體積。
在體外培養中,不同的組織來源前脂肪細胞的油脂含量,成脂轉錄因子表達和TNFalpha誘導的凋亡均有不同。
同時研究表明它還與脂肪分化以及許多生理病理過程密切相關,如脂肪代謝、能量平衡、肥胖、糖尿病、高血脂和乳癌。
細胞培養常見問題及解決方法
問題 | 原因 | 解決方案 |
細胞生長緩慢 | 生長培養基使用不當 | 按照生產商的建議,使用相應的預熱生長培養基。 |
生長培養基中血清質量差 | 使用其他批次血清。 | |
傳代操作不當 | 按照生產商的建議消化時間及傳代比例進行操作。 | |
換液過于頻繁 | 降低換液頻率,參考生產商推薦的換液頻率。 | |
細胞傳代次數過多 | 使用傳代次數較少的健康細胞。 | |
細胞生長超過匯合狀態 | 哺乳動物細胞傳代應在細胞處于對數期、未達到匯合狀態時進行,建議細胞密度達 80-90%傳代。 | |
細胞被支原體污染 | 將細胞、培養基和試劑丟棄;新取一只凍存細胞,并且使用新的培養基和試劑。 | |
細胞復蘇存活率低 | 細胞凍存不當 | 新取一只凍存細胞,并儲存在液氮中。將細胞儲存在液氮中,直至復蘇。 |
自行制備的凍存細胞無活性 | 將細胞按照生產商推薦的密度凍存。 | |
制備凍存細胞時使用傳代次數少的細胞。 | ||
嚴格按照生產商推薦的操作程序凍存細胞。請注意本手冊推薦的冷凍程序是凍存細胞的一般流程,只能作為指導原則使用。 | ||
新取一只凍存細胞。 | ||
細胞復蘇方法不當 | 嚴格按照生產商推薦的操作程序復蘇細胞。請注意本手冊推薦的解凍程序是復蘇細胞的一般流程,只能作為指導原則使用。 | |
確保冷凍細胞解凍迅速,接種前用預熱的生長培養基緩慢稀釋細胞。 | ||
復蘇培養基使用不當 | 使用生產商推薦的培養基。確保培養基使用前已經預熱。 | |
細胞稀釋過度 | 按照生產商的建議,將解凍后的細胞高密度接種,以改善復蘇效果。 | |
處理細胞時動作不夠輕柔 | 凍存和復蘇過程對大多數細胞都會造成不利影 響。不要通過渦旋振蕩或者用力敲打培養瓶的方法使細胞脫落(培養昆蟲細胞時除外),也不要高速離心細胞。 | |
凍存液中所用保護劑在儲存過程中未避光 | 如果未避光儲存,凍存保護劑會轉變為對細胞有毒性的物質;新取一只凍存保護劑,重新凍存細胞。 |
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收貨后十個工作日內有其他問題提供照片可半價重發
后,通過低溫保藏儲備一些細胞,以防支原體大面積來襲。如果支原體有抬頭的跡象,或常規檢測呈陽性結果,那么可靠的補救措施是扔掉所有培養物,清潔培養箱和超凈臺,一切從頭開始。當然,你得確保儲備的細胞是不含支原體的。
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