產(chǎn)品名稱:HT22細胞|HT22小鼠海馬神經(jīng)元細胞系
包裝:內(nèi)層無菌自封袋;防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說明書
細胞來源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:1-2周
運輸方式:快遞運輸
售后:收到細胞后12天,如發(fā)現(xiàn)細胞有質(zhì)量問題(如污染,死亡,快遞運輸?shù)仍颍r,應出具書面質(zhì)量問題報告并及時通知銷售人員,我們將盡快為您解決!
- HT22細胞|HT22小鼠海馬神經(jīng)元細胞系
- 三、細胞生長條件:
- 組成:
組份 | 數(shù)目 |
細胞 | 1 T-25瓶 |
細胞說明書 | 一份 |
- 細胞簡介:
生長特性: | 貼壁生長
|
細胞來源: | 從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進 |
培養(yǎng)條件: | 培養(yǎng)基:1640 +10%FBS(推薦德國BI 04-002-1A 優(yōu)等胎牛血清) 氣相:空氣95%,二氧化碳5% 溫度:37℃ |
培養(yǎng): |
1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行2-3小時的緩沖,.然后置于無菌操作臺,打開瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代; 2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%,需要對其進行傳代,di一次傳代比例為1:2。 3傳代步驟:將0.25%含EDTA胰酶置于37°預熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入1mlPBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預熱好的胰酶,置于37°孵育消化(di一次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為*消化時間,記錄*消化時間,以便于下次消化),消化好后加入1ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之*脫落,然后收集細胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細胞,進行傳代。
二、懸浮細胞 1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒,然后置于無菌操作臺,打開瓶口,輕輕吹打后,將其中的細胞懸液轉移到離心管中,然后1200rpm離心3min,去上清; 2.將離心好的細胞轉移至T-25瓶中,并加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基,然后將其置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液(離心后去舊液,加入新鮮培養(yǎng)基); 3.顯微鏡觀察細胞數(shù)目比較多時,對其進行傳代,di一次傳代比例為1:2(離心后平均分成兩瓶培養(yǎng))。
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細胞總數(shù): | 1~3*106 |
傳代周期: | 2-3天 |
傳代比例: | 1:2~1:4 |
換液頻率: | 2-3天 |
凍存液: | 90%FBS+10%DMSO |
三、 細胞凍存
<1>凍存操作
① 凍存液配方:建議使用92%FBS+8%DMSO,客戶自身實驗室所使用的凍存液也可以適用,血清濃度不低于30%,DMSO含量不高于12%即可。
② 收集細胞按照以上細胞傳代步驟操作至第④步后,將細胞懸液收集入15mL離心管,離心(1200rpm,3min);
③ 棄上清,加入配制好的凍存液,重懸細胞,懸液加入無菌凍存管中;
④ 將凍存管在4℃靜置10min,后將之正置于室溫下的厚壁有蓋泡沫盒中,蓋緊盒蓋,放入-80℃冰箱過夜,第二天放入液氮即可長期保存。
<2>相關問題
① 10cm皿的細胞長滿一般可以凍存2-3管,部分細胞長的比較慢,凍存的細胞密度要稍微大點,以防止復蘇后生長困難。
② 凍存液中含的DMSO請使用細胞級DMSO,同時濃度不要太高。部分細胞在10%DMSO條件下凍存會死亡,所以DMSO濃度5%-8%是比較推薦的濃度。
③ 細胞凍存及復蘇遵循慢凍快融的原則,即凍存時溫度不能急劇下降,應控制溫度緩慢下降。復蘇時應快速融化,融化后盡快加入培養(yǎng)基中。
④ 凍存時建議設置凍存檢測,即取0.2-0.3mL的凍存液重懸的細胞于一個凍存管中,與正常體積凍存的細胞共同凍存,至液氮后復蘇檢查凍存結果。凍檢合格前,留一部分細胞繼續(xù)培養(yǎng),以防萬一。
四、 細胞復蘇
<1>復蘇步驟
① 將凍存細胞從液氮中取出后迅速放入37℃溫水中搖晃融化,時間1min左右;
② 于1000rpm離心1min,棄凍存液,加入1mL新的*培養(yǎng)基重懸細胞;
③ 接種至新培養(yǎng)瓶或皿中,補加足量*培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
<2>相關問題
① 復蘇過程應迅速操作,時間不能太長。
② 復蘇過程中注意污染,小心操作。
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