上海琛藝實業有限公司新增細胞庫，具有自己的研發細胞培養庫，上千株細胞具有STR鑒定，元旦大放送，*，同時還有好禮相送，具體歡迎咨詢。。

產品名稱：ID8細胞|ID8小鼠卵巢癌細胞 

·         細胞數量： 1*10^6

·         細胞種屬： 小鼠源

·         生長特性： 貼壁

·         培養基： DMEM-H

·         形態特征： 成纖維細胞樣

·         傳代方法： 1:3傳代,2-3天傳一代

·         培養條件： 胎牛血清至終濃度為10％。環境：空氣，95％;二氧化碳（CO2），5％；溫度，37℃

·         細胞描述： 親本L的亞克隆，是早建立的連續傳代細胞之一，L細胞源自100天的雄性C3H/An小鼠的皮下網眼狀空隙和脂肪組織。APRT+，HPRT+。

·         細胞凍存： 液氮凍存（凍存液基礎培養基+20%FBS+10%DMSO）

·         細胞運輸： 干冰運輸（2ml凍存管）或活細胞運輸（T25瓶）

ID8細胞|ID8小鼠卵巢癌細胞 

形態特性 上皮細胞樣　 
生長特性 貼壁生長 
特征特性 CHO-HCV-C細胞整合有丙型肝炎病毒的Core基因，能穩定表達C蛋白，是HCV基礎研究的*摸型。它由武漢大學病毒學國家重點實驗室郭佳博士于2008年構建并保存。 
中國倉鼠卵巢細胞（亞系克隆）；CHO-HCV-C培養條件 DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 10%FBS　 
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代 
傳代情況 C15 
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS　 
細胞周期分為細胞間期和細胞分裂期，細胞間期較長，而細胞分裂期較短。
細胞間期是為細胞分裂的準備時期，表現為細胞增大，營養物質增多。細胞分裂期則是一個細胞由兩個細胞分解為一個細胞的過程。
細胞是生命的基本單位，細胞的特殊性決定了個體的特殊性，因此，對細胞的深入研究是揭開生命奧秘、改造生命和征服疾病的關鍵。細胞生物學已經成為當代生物科學中發展快的一門學科，是生物、農學、醫學、畜牧、水產和許多生物相關專業的一門必修課程。
依據細胞種類和濃度，于無菌操作臺內取 10 ml培養基加至 T25或 T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液，緩緩加入T25 或T75 flask 內之培養基， 混 合均勻，放入37 °C，5 % CO2 培養箱培養。

注意事項

凍存細胞接收后的處理：

1.干冰運輸，收到細胞后立即轉入-80℃冰箱短暫中轉或直接復蘇；
2.收到細胞后，若發現干冰已經*揮發、凍存管瓶蓋破裂脫落,請立即拍照后與我們聯系。

復蘇細胞接收后的處理：

1.收到細胞后，請首先檢查培養瓶是否破損或漏液，培養液是否混濁，如有漏液及培養液混濁情況請立即拍照把圖片發給我們。
2.75%酒精消毒瓶身后放培養箱中靜置4-6h后，在顯微鏡下確認細胞狀態并拍照100倍和200倍的照片，若有貼壁細胞脫落，可收集上清離心，將沉淀用新的培養基接種至新的培養瓶或培養皿中。
3.建議收到當天不要消化處理，如果細胞長滿90%，可選擇傳代處理。
4.如您收到細胞3天內沒有反饋相關問題，出現的細胞問題將不提供免費重發服務。

細胞培養方法：

1. 細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
   ①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
   ②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
   ③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
   ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
   ⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
   ⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
   2、細胞復蘇：
   ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
   ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
   3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
   ①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
   ②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
   ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
   ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

1. 為什么培養的細胞要及時傳代？
    答：體外培養的細胞大多具有生長接觸抑制的特性，也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候，它就會停止生長，及時傳代后，細胞的生長得以繼續。
2.培養液pH下降很快可能原因有哪些？其解決辦法是什么？
    答：通常細胞生長得非常快時，pH值通常下降得很快。此時可以及時傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進行解決。此外，培養瓶蓋擰得太緊、NaHCO3 緩沖系統緩沖能力不夠、培養液中鹽濃度不正確、細菌、酵母或真菌污染等也能導致pH值通常下降得很快。
       (1)按培養液中NaHCO3 濃度增加或減少培養箱內CO2 濃度，2.0g/L 到3.7g/L 濃度NaHCO3對應CO2濃度為5％到10％。
       (2)改用不依賴CO2培養液。
       (3)松開瓶蓋1/4 圈。加HEPES 緩沖液至10 到25mM終濃度。
       (4)在CO2 培養環境中改用基于Earle′s 鹽配制的培養液，在大氣培養環境中培養改用Hanks 鹽配制的培養液。
       (5)如果是污染造成的則丟棄培養物或用抗生素除菌。
3.培養液pH對細胞生長的影響？
    答：由于大多數細胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍可能對細胞生長將產生有害的影響。但各種細胞對pH的要求也不*相同，原代培養細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。但總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些。在配制培養用液時，需要注意一點：培新配的培養基在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。
4.購買之細胞冷凍管經解凍后，為何會發生細胞數目太少之情形？
    答：研究人員在冷凍細胞之培養時出現細胞數目太少，大都是因為離心過程操作上的失誤，造成細胞的物理性損傷，以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心，應待細胞生長隔夜后再更換培養基即可。但對于DMSO敏感的細胞，還是復蘇細胞時，用離心去除DMSO比較好。
5.購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因？
    答：研究人員在細胞培養時出現存活率不佳，原因比較復雜，常見原因可歸納為：培養基使用錯誤或培養基品質不佳；血清使用錯誤或血清的品質不佳；解凍過程錯誤；冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心；懸浮細胞誤認為死細胞；培養溫度使用錯誤；細胞置于–80 ℃太久等。建議嚴格參照ATCC或ECACC的標準操作規程進行細胞復蘇、凍存等工作。
6.支原體污染會對細胞培養有何影響？
    答：支原體污染幾乎可影響所有細胞之生長參數、代謝及研究之任一數據。故進行實驗前，必須確認細胞為mycoplasma-free，實驗結果之數據方有意義。
7.冷凍保存細胞之方法？
    答：冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃(30－60 分鐘)→-20℃( 30 分鐘) → -80℃(16－18 小時或隔夜)→ 液氮罐長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80 ℃以下， 再放入液氮中長期儲存。注意：-20℃不可超過1 小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
 
8.懸浮細胞應如何繼代處理？
    答：一般僅需持續加入新鮮培養基于原培養瓶中，稀釋細胞濃度即可。若培養液太多時可分瓶取出一部份含細胞之培養液至另一新的培養瓶中，加入新鮮培養基稀釋至適當濃度，重復前述步驟即可。
9.欲將一般動物細胞離心下來，其離心速率應為多少轉速？
    答：欲回收動物細胞，其離心速率一般為300×g (約1,000rpm)，5 - 10 分鐘，過高之轉速過長時間都將造成細胞死亡。合適的離心轉速是根據相對離心決定。 RCF=1.119×105×r×(rpm)2，其中 r為離心機轉軸中心與離心套管底部內壁的距離；rpm為離心機每分鐘的轉數；RCF(relative eentrifugal force)為相對離心力，以重力加速度g(980.66cm/s2)的倍數來表示表示單位。
10.培養細胞時應使用5%還是10%CO2，或者根本沒有影響？
    答：一般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統， 而培養基中NaHCO3的含量將決定細胞培養時應使用的CO2濃度。當培養基中NaHCO3 含量為每公升3.7g時，細胞培養時應使用10% CO2；當培養基中NaHCO3為每公升1.5g時，則應使用5%CO2培養細胞。
11.細胞冷凍管解凍培養時，是否應馬上去除DMSO？
    答：除少數特別注明對DMSO敏感之細胞外，絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞)，在解凍之后，應直接放入含有10-15ml新鮮培養基之培養方瓶中，待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。
12.冷凍管應如何解凍？
    答：取出冷凍管后，須立即放入37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1－2 分鐘內大部分融化，特別注意，需殘留一小塊冰塊，就可拿到超凈工作臺操作細胞，用75％消毒凍存管，用新鮮培養基將細胞轉移至培養瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂

13.如何用臺盼蘭計數活細胞？

    答：將樣品適當稀釋后，用稀釋后的樣品和0.4％的臺盼蘭溶液按1:1混合后，用移液槍點樣到血球計數板，置于倒置顯微鏡下觀察、計數，其中藍色細胞是死細胞，因活細胞排斥臺盼蘭，不被染色。
14.細胞欲冷凍保存時，細胞冷凍管內應有多少細胞濃度？
    答：冷凍管內細胞數目一般為1-8×106 cells/ml vial。
15.細胞冷凍培養基之成份為何？
    答：動物細胞冷凍保存時常使用的冷凍培養基是含9 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原來細胞生長用之新鮮培養基均勻混合之。注意：由于DMSO 稀釋時會放出大量熱能，故不可將DMSO 直接加入細胞液中，必須使用前先行配制完成。
16.如何消除組織培養的污染？
    答：當重要的培養細胞污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺，檢查HEPA過濾器。
　　高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養污染的實驗步驟。
1)在無抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞，稀釋到常規細胞傳代的濃度。
2)分散細胞懸液到多孔培養板中，或幾個小培養瓶中。在一個濃度梯度范圍內，把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如，兩性霉素B推薦下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。
3)每天觀測細胞毒性指標，如脫落，出現空泡，匯合度下降和變圓。
4)確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度2－3倍濃度的抗生素的培養液培養細胞2－3代。
5)在無抗生素的培養基中培養細胞一代。
6)重復步驟4。
7)在無抗生素的培養基中培養4－6代，確定污染是否以已被消除。
17.培養細胞出現死亡其可能的原因有什么？解決辦法有哪些？
    答：可能的原因有培養箱內無CO2；培養箱內溫度波動太大；細胞凍存或復蘇過程中損傷；培養液滲透壓不正確；培養液種有毒代謝產物堆積等。解決辦法可以檢測培養箱內CO2濃度，檢查培養箱內溫度；取新的保存細胞種；檢測培養液滲透壓等；換入新鮮培養液等。
18.國內可以買到細胞株的地方有哪些？
答：可以從國內多家代理廠家買到ATCC或ECACC的細胞株
19.細胞的滲透壓耐受性是多少？
    答：細胞必須生活在等滲環境中，大多數培養細胞對滲透壓有一定耐受性。人血漿滲透壓290mOsm/kg, 可視為培養人體細胞的理想滲透壓。鼠細胞滲透壓在320mOsm/kg左右。對于大多數哺乳動物細胞，滲透壓在260－320mOsm/kg的范圍都適宜。