一、實驗前將所有試劑平衡至室溫，包括樣本、TMB（非常重要）。

二、強烈建議老師在操作的時候每個樣本包括標準品做復孔（請務必這樣操作），因為這樣可以：

        •  求平均值，確保實驗結果的準確性

        •  對試劑盒的性能進行評估

        •  對自己的操作進行評估

        •  解決跳孔

三、為保證老師 ELISA 實驗結果準確 ，其中幾點重要的操作注意事項請務必參考：

如果以下表述與說明書中不一致，請按照實驗對應說明書的要求操作 。

1、標準品溶解：標準品溶解嚴格按照說明書進行操作，建議老師進行標準品稀釋時，在EP管中進行。

2、孵育：說明書中進行孵育的時候，一定要用微孔板振蕩器振蕩，這個很重要，利于抗原抗體充分結合。

3、洗板：建議按照說明書操作，每次洗滌至少洗液浸泡30s，重復6次，洗板時間太短、次數太少會導致實驗效果不佳，延長洗板時間和增加洗板次數可以使背景更干凈。

4、如何控制標曲顯色？(僅針對雙抗夾心法ELISA試劑盒)

5 - 30分鐘顯色時間為經驗范圍，每個具體的實驗，可根據以下情況，確定大致的顯色時間：

1) 肉眼觀察：標曲S5孔有淡藍色、Blank孔無明顯藍色時，即可終止。

2) 儀器判斷：630 nm左右波長下，標曲S1孔的OD值達到0.5 - 0.7、S5孔的OD值達到0.05 - 0.08、Blank孔的OD值小于0.05時，即可終止。

3) 高敏系列試劑盒因靈敏度更高，需嚴格控制顯色時長，可較普通試劑盒適當縮短顯色時間。