操作步驟雖然ELISA試劑盒實驗過程操作點的許多需要掌握操作步驟。如果稍有不慎，操作不合理的地方，會造成很多問題，ELISA試劑盒影響了檢測的精度，大大降低了測試質量。如花板，假陽性，全彩色，全彩色，顏色空間的低。根據已經使用的結果，認為ELISA試劑盒法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查，而且由于一天之內可以檢查幾百甚至上千份標本。因此，也適合于血清流行病學調查。本法不僅可以用來測定抗體，而且也可用于測定體液中的循環抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA試劑盒法在生物醫學各領域的應用范圍日益擴大。

一、試劑因素
    1、試劑的選擇：免疫檢測的原理均基于抗原抗體反應。由于該反應過程受多種因素的影響，如普遍存在基質效應、交叉反應等，因而檢測結果難以溯源，ELISA試劑盒不同方法、不同試劑之間甚至同一試劑不同批號間結果均缺乏可比性。試劑質量在很大程度上決定了檢測的水平，因此在引入新項目之前必須對試劑進行嚴格的評估。
    2、試劑的準備：不同批次的ELISA試劑盒在制作過程中很難保證質量*一致，即使是通過批批檢的項目其檢測結果也存在差異，因此必須選擇和訂購長批號的試劑，并保證保存條件。嚴格執行這一標準可以避免因試劑批號改變而重新建立質控體系及重新評估試劑的復雜過程，ELISA試劑盒并且能夠保證結果的穩定性；對于效期短、使用率低的試劑，應當小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，避免反復凍融造成試劑的失效。

二、方法學的影響
    ELISA測定模式包括以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法，其中競爭抑制法因受操作時差所引起的平競爭等因素的影響，結果重復性較差，質量較難控制。