手機版
化工儀器網手機版
化工儀器網小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
淺析人ELISA試劑盒實驗操作步驟
ELISA操作前，應做好實驗的設計、選擇適合自己技術范圍和靈敏度的人ELISA試劑盒 、提前訂購和準備試劑及耗材、處理樣本等準備工作。
在收集標本前需有一個完整的計劃，需要清楚要技術的成份是否足夠穩定。ELISA技術提倡新鮮標本盡早技術，對收集后當天就進行技術的標本，及時儲存在4℃備用，如有特殊原因需要周期收集標本，請取材后，將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實驗質量，所以避免反復凍融。
二、ELISA標準品溶解
標準品是人ELISA試劑盒的技術抗原的一個度量標尺，因此標準品的溶解、倍比稀釋和保存要特別注意以下細節：凍干標準品溶解按照說明書的要求，準確復溶。在冰上操作標準品為佳，靜止5－10分鐘，輕輕搖勻后按照一次量分裝，在-20度或-70度保存。標準品嚴禁反復凍融。標準品的倍比稀釋應事先做好準備，如離心管的準備和編號以及稀釋液的準備；稀釋時，應充分混勻；采用進口或者硅化的EP管，減少蛋白吸附。在實驗孔內進行倍比稀釋時，注意操作規范，槍頭勿刮劃預包被的孔底。
三、ELISA操作中的洗滌
洗滌是ELISA實驗中是多次數的操作，也是非常重要的步驟。不嚴格的洗滌容易出現洗不干凈或交叉污染現象，實驗重復效果差的現象。不管用多道加樣器、洗瓶、吸管，還是洗板機，嚴格按照說明書操作不要減少步驟洗滌的洗滌體積、洗滌時間和洗滌次數。注意標準化操作將減少實驗誤差和不同實驗之間的誤差。操作者常出現洗板不干凈現象，請比照“手工洗板小貼士”操作：
a)洗液不要溢出孔外，以免污染相鄰的孔，特別是每次洗板的前兩遍，若高濃度的孔污染了低濃度的孔或空白孔，其造成的交叉污染的孔是洗不掉的，背景肯定會增高。
b)特別注意：設計實驗的時候要考慮實驗孔的位置，保證甩掉洗液時，空白孔、低濃度孔或陰性對照組在上面或一側或分開。同時注意甩掉洗液的動作翻轉（從正上方旋轉120－150度）要迅速、干脆。甩板不要手腕左右搖擺、旋轉來甩液體！甩出后以直線方式補2－3次甩出液體。
c)用干凈的濾紙，不要用衛生紙，因為細小粉塵或者碎屑容易吸附到孔底，導致洗板不干凈，結果偏高或偏低，重復孔的數值也會相差很大。
d)每次拍板不要重復在一個地方拍，特別是洗去酶的步驟；拍板不宜過輕，否則拍不干凈，拍板很用力不會對蛋白有什么影響。但注意不要太重，以至把板條給拍斷。每次洗板后輕叩幾下，后一次一定要扣干凈。
e)不能減少洗液體積、洗板時間和次數。洗板時間太短，洗板效果不佳。延長洗板時間和增加洗板次數可以使背景更干凈。
免責聲明
- 凡本網注明“來源：化工儀器網”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品，未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工儀器網”。違反上述聲明者，本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源（非化工儀器網）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時，必須保留本網注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發表之日起一周內與本網聯系，否則視為放棄相關權利。
采購中心