一、 實驗儀器與試劑
表格一:實驗儀器
儀器 | 廠家 | 型號 |
細胞培養箱 | Thermo Scientific | HERA cell CO2 |
激光共聚焦顯微鏡 | Leica | TCS SP5 |
表格二:試劑
試劑 | 廠家 |
細胞培養基 | Gibco |
PBS (0.1 M, pH 7.4) | 自配 |
4 %多聚甲醛溶液 | 索來寶 |
BSA | Sigma |
Triton-x-100 | 生工生物 |
FITC 標記羊抗兔熒光二抗 | Santa Cruz |
DAPI | 碧云天 |
二、 實驗步驟
制作細胞爬片,根據實驗方案進行加樣操作;
反應 24h 后,棄原有培養液, PBS 洗 1 次;
4%的多聚甲醛 4 度固定 15 分鐘,PBS 洗 2 次,5 分鐘/次;
4. 加入 0.1%的 Triton-x-100,室溫孵育 15 分鐘;
5. PBS 洗 3 次,5 分鐘/次;
6. 10%BSA 封閉 30 分鐘;
加入一抗 50μL(稀釋度為 1:100),4℃過夜孵育;
第二天復溫 30min,PBS 洗 3 次,5 分鐘/次;
每組分別加入 FITC 標記羊抗兔熒光二抗 50μL(稀釋度為 1:500),37℃培養 30 分鐘;
PBS 洗 3 次,每次 5 分鐘;
11. DAPI 染色 5 分鐘;
PBS 洗 3 次,每次 5 分鐘;
在激光共聚焦顯微鏡上觀察(使用 405nm 和 488nm 的激發光源進行熒光檢測)。
三、 實驗結果
免責聲明
- 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。