Immunetech的重組蛋白分為凍干粉和溶液態兩種保存方法,原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀況,真核細胞表達的重組蛋白為溶液態保存,這樣使得重組蛋白非常穩定,在-80℃條件下可保存數年。
凍干粉在運用前需進行溶解,其間溶解的辦法非常要害,因為溶解不好會降低蛋白的功效。溶液態保存的重組蛋白在凍融稀釋運用過程中也需求細心留意,這些都是用戶在實踐應用中經常遇到的問題。
(1)重組蛋白的保護劑。
在凍干和貯存過程中常用的保護劑或穩定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。咱們通常加8%(質量比體積)的海藻糖和甘露醇作為凍干保護劑。海藻糖可顯著阻撓蛋白質二級結構改動以及凍干過程中蛋白質的擴展和集合,甘露醇也是一種遍及應用的凍干保護劑和填充劑。
(2)原核細胞表達的重組蛋白。
Immunetech大腸桿菌表達的凍干重組蛋白,現已從容納體中提純,添加了蛋白保護劑,運用過濾后的無菌水作為復溶劑即可,復溶凍干蛋白100μg,用86μl的超純水,悄悄搖晃使蛋白溶解。再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可*溶解,必定不能運用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃。
(3)真核細胞表達的重組蛋白。
有活性的蛋白質不只需轉錄和翻譯,還要進行翻譯后的加工,使得蛋白質的空間折疊方法保持正常,所以重組蛋白必須在真核細胞中進行,如哺乳動物細胞能夠辨認和去除基因中的內含子,對翻譯后的蛋白質進行加工。這樣表達的蛋白質具有生物活性。咱們用溶液態來保存,保持了其杰出的活性和穩定性。
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