DH5α 感受態細胞

儲存條件：-70℃保存，避免反復凍融。

組成 YBC102-01 BC102-02

DH5α Competent cells 10×100µl 20×100µl pUC19（0.1ng/µl） 5µl 5µl

產品介紹：

本公司生產的 DH5α感受態細胞是采用大腸桿菌 DH5α菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于

DNA 的化學轉化。使用 pUC19 質粒檢測，轉化效率可達 108 cfu/µg，-70℃保存幾個月轉化效率不發生改變。每支感受態可以酌情分裝使用，降低了實驗的成本。質量穩定，使用方便，質優價廉。

基因型：

F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

產品特點：

一種用于鋪制與培養質粒平板和粘粒平板的重級缺陷的抑制型株。其φ80 lacZΔM15  基因的產物可與 pUC

載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現α互補，可用于藍白斑篩選。操作步驟（以下操作均按無菌條件的標準進行）：

提示

u 感受態細胞應保存在-70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免降低感受態細胞的轉化效率。

u 進行轉化操作時，應根據相應溫度及無菌條件的要求進行。

u 為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉化，將損失降到低。

1. 取感受態細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中，置于冰浴中。

（一次轉化感受態細胞的建議用量為 50-100μl，可以根據實際情況分裝使用。應注意所用DNA 體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一。以下實驗以 100μl 感受態細胞為例。）

2. 向感受態細胞懸液中加入目的 DNA  ，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，在冰浴中靜置 30 分鐘。

• 將離心管置于 42℃水浴中放置 60 秒，然后快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻 2 分鐘，該過程不要搖動離心管。（此步驟也可將離心管置于室溫進行，時間不需十分準確，夏季或室溫較高時，可放置 5-8 分鐘左右；如果室溫較低，可延長時間至 8-15 分鐘左右。條件允許建議使用 42℃熱激方法。）

4. 向每個離心管中加入 500μl 無菌的 SOC 或 LB 培養基（不含抗生素），混勻后置于 37℃ 150rpm，搖床振蕩培養 60 分鐘，目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

5. 無菌條件下，取適量菌液加到含相應抗生素的 LB 固體培養基平板上，用無菌的細菌涂布器或玻璃珠將細胞均勻涂開。等平板中的液體*吸收后，倒置平板，37℃培養 12-16 小時。（涂布用量可根據具體實驗來調整。轉化質粒在 10ng 左右，90mm 平皿涂布 100µl，55mm 平皿涂布 50µl；連接產物的轉化菌液建議離心后倒掉大部分上清，余 200µl，取 100µl 用于涂布。）

6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，視平板上菌落生長情況決定去留。

（質粒快速轉化步驟：將步驟 2 的時間縮短到 5 分鐘，對于氨芐青霉素抗性的質粒，步驟 3 完成后，可直接涂布或劃線于含氨芐青霉素抗性的LB 平板上。其它抗性的質粒仍需 60 分鐘的復蘇培養。）

相關試劑及培養基的制備方法：

LB 液體培養基：稱取 10g，Tryptone，5g Yeast Extract 和 10g NaCl 置于 1L 燒杯中。加入約 800ml 的去離子水，*溶解后用 2mol/L 的 NaOH 溶液調節 pH 值至 7.0。加去離子水定容至 1L。分裝后，121℃ 高壓滅菌 20 分鐘。

2. SOB 和 SOC 培養基：稱取 20g Tryptone，5g Yeast Extract，0.5g NaCl 置于 1L 燒杯中加入約 800ml 的去離子水，*溶解后再補加 10ml 250mM KCl 溶液，滴加 5M NaOH（約 0.2ml）調 pH 值 7.0。加入去離子水將培養基定容至 1L。121℃滅菌 20 分鐘。使用時加入 5ml 滅菌的 2M MgCl2 溶 （此種培養基稱為SOB）。再補加經 0.22um 過濾除菌的 1M 葡萄糖溶液 2ml（此種培養基為 SOC）。

3. 轉化復蘇細菌用的液體 LB 培養基或SOC 培養基：可以一次高壓 50ml 液體培養基，無菌狀態按 1ml 每管分裝于高壓滅菌的 1.5ml 離心管中，裝于自封袋中，凍存于-20℃中，每次用一支。可以極大地避免培養基污染和減少勞動量。

4. LB 固體選擇培養基：100ml LB 液體培養基中加入 1.5g 瓊脂粉，搖勻后，121℃高壓滅菌 20 分鐘。冷卻至 50℃左右時加入相應濃度的抗生素（如 AMP 濃度通常為 100ug/ml），混勻后倒在細菌用的無菌培養皿中，等瓊脂凝固后即可使用。

5. IPTG：稱量 1.9g IPTG（MW=238.31）充分溶解于 40 ml 滅菌水，濃度為 200mmol/L。用無菌 0.22μm

過濾膜過濾除菌。小份分裝后，-20℃保存。

6. X-gal：用DMF（二甲基甲酰胺）配制成 20mg/ml，小份分裝（1ml/份）后，-20℃避光保存

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PCR 產物純化回收試劑盒說明書