單個(gè)二倍體細(xì)胞
在剖析單精zi曾經(jīng)，Li等人對(duì)個(gè)別二倍體細(xì)胞內(nèi)的β珠蛋白基因進(jìn)行過研究。兩個(gè)組織培育細(xì)胞株用于這些試驗(yàn)。其中一個(gè)純合是鐮刀型細(xì)胞密碼子6（βS）發(fā)作突變，另一個(gè)純合子則來源于正常的βB等位基因。擴(kuò)增含有密碼子6的β珠蛋白片段的引物，及能夠區(qū)別這兩個(gè)特異的等位基因的寡核苷酸探針（ASO）現(xiàn)已報(bào)道過。βA純事細(xì)胞和βB純合細(xì)胞和βS純合細(xì)胞在同一組織培育瓶中一起培育數(shù)天。將用相差顯微鏡觀察到的混合培育的單個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)入溥塑料胡管內(nèi)。

別離將單個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)入含裂解液的PCR管中，保溫后，參加PCR緩沖液，緩中有四dDNP．Taq dna聚合酶和擴(kuò)增已知珠蛋白基因的PCR引物。95℃10分鐘變性靶DNA，然后依據(jù)已發(fā)表方法的改進(jìn)計(jì)劃進(jìn)行50全循環(huán)的擴(kuò)增。經(jīng)過打點(diǎn)雜交，等量的擴(kuò)增產(chǎn)品打點(diǎn)于尼龍膜后，擴(kuò)增產(chǎn)品別離與βA和βS的探針雜交。所剖析的37個(gè)細(xì)胞中，84％細(xì)胞只與βA和βS探針雜交，雜交強(qiáng)弱各不相同；19個(gè)與βA探針．12個(gè)與βS探針雜交。

12個(gè)以水作空白對(duì)照的反響管中瓜呈陰性，它標(biāo)明疏忽不記DNA的污染。沒有與兩種探針都雜交的樣品，它暗示轉(zhuǎn)入到反響管中的單個(gè)細(xì)胞，而且組織培育基中存在的從βA或βS細(xì)胞中裂解出來的 DNA并未吸附在單個(gè)細(xì)胞上。

單精zi的剖析

我司等人隨后對(duì)位于染色體19編碼LDL受體(LDLr)的基因的雜合體單精zi的基因型進(jìn)行剖析。依據(jù)已知的DNA序列，他們用PCR和ASO剖析檢測(cè)LDLr的RFLP。PCR的引物和探針曾經(jīng)已有報(bào)道。單個(gè)精zi的別離與二倍體細(xì)胞的別離方法相同，經(jīng)蔗糖梯度 離心得到純化的精zi，精zi于－20℃可保藏8個(gè)月。

顯微鏡下將單個(gè)精zi吸入毛細(xì)塑 料針管內(nèi)，然后轉(zhuǎn)入試管內(nèi)以作裂解。裂解的方法與發(fā)表的方法沖液(50mM KCL， 10mM Tris.HCL，pH8.3，2.5mM MgCl2，0.1mg/ml明膠），0.05mg/ml蛋白酶K，20mM DTT和1.7μM SDS。37℃保溫1小時(shí)，參加pcr反響物曾經(jīng)，樣品加熱到85℃。PCR擴(kuò) 增。

對(duì)80個(gè)精ziLDLr基因型已作過剖析。55%的雄配子顯示出雜交信號(hào)。22個(gè)帶著 LDLr等位基因，21個(gè)帶著LDLr2基因。僅一個(gè)與兩種探針雜交都呈陽性。16支對(duì)照反 應(yīng)管中參加所有反響試劑但沒有精zi，結(jié)果無雜交信號(hào)出現(xiàn)。