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單細胞鋪板的三種手法

來源:Bio-Techne   2020年02月14日 16:36  
    單細胞鋪板手法一:均勻單層。要鋪成那種很均勻的單層細胞,手法如下:
    1,細胞板子先加入一定量(一般是總量培養基的1/5)的培養基,放入孵箱中放置10-20min。
    2,在滴入細胞時,細胞板子與通風櫥有一定的角度,沿著板壁的孔邊緣滴入。
    3,滴入后,呈“8”字方法搖晃5-8次。
    4,置于水平臺上,放置10-20分鐘
    5,放入孵箱。在細胞鋪板時,每一種板子的孔面積有多大,培養的液體量以及加入細胞量。
    手法二:中間少,周圍多。其實細胞鋪板不一定都需要單個單個的那么均勻,比如,做免疫熒光時,學霸姐姐喜歡鋪中間少,周圍稍多的板子,因為這個樣子可以同時檢測到單個細胞的形態,另外又可以照一點低倍的用作于統計,所有的細胞都在一個環境中。
    要鋪這樣的細胞樣子,那鋪細胞時要注意手法了:
    1,細胞板子不需要提前用培養基潤洗,直接從邊上滴入混有細胞的培養基。
    2,放置30s-1min后,前后搖晃5-8次。
    3,放在水平臺上靜置2-5min。
    4,放入孵箱。
    其實在單細胞鋪板的時候,你要準確的知道你所養的細胞的特性,比如:
    1,細胞的名稱,來源。2,細胞的屬性。3,細胞分裂時間。
    細胞鋪板后,細胞狀態不好怎么辦?
    如果出現這種情況,學霸姐姐建議你從以下幾個方面考慮一下原因:
     1,用來鋪板的細胞狀態本身就不好。2,用來鋪板的細胞傳代次數太多,有些老化。3,胰酶消化時間過長。4,中和的血清量及時間不夠。5,支原體污染。
    細胞鋪板是一個經驗積累的過程,你的手法也需要積極的改進,不要生搬硬套,也不要一味追求的鋪均勻,在實驗過程中多思考細胞本身的特征和屬性,出現問題積極解決即可。

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