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環孢素A結合蛋白(CypA)三類Ig自身抗體的測定

來源:上海源葉生物科技有限公司   2011年06月30日 16:44  

環孢素A結合蛋白(cyclophilinA,CypA)是生物細胞胞漿中的一種結構高度保守的低分子量蛋白(18 000),具有肽酰脯酰順反異構酶(pplase)活性,在細胞內蛋白質合成、折疊和轉運過程中起重要作用。因環孢素A(CsA)具有選擇性免疫抑制作用而廣泛用于防治器官移植排斥反應,其效應的發揮主要是通過細胞內受體CypA的存在而起作用的。CsA與CypA結合后,即可影響mRNA的轉錄和某些蛋白質的表達,抑制T細胞的增殖與細胞因子的分泌。虞偉等利用基因重組技術,克隆表達出人CypA產物作為包被抗原,建立了檢測三類Ig抗體的間接ELISA方法,現將其方法簡要介紹如下。

操作步驟 將重組人CypA(hcypA)抗原溶于pH9.6的0.05mol/LCBS緩沖液中,調整濃度至11ug/mL,包被聚苯乙烯反應板,100uL/孔,37℃ 1h后洗滌,加入l:50稀釋的待測血清,同時沒空白,陰性和陽性對照孔,43cC40min后洗滌,再分別加入HRP標記的抗人γαμ鏈抗體的F(ab’)2,43℃40min,洗后加底物(OPD-H202)溶液,37℃避光顯色5min,用2mol/LH:S04終止反應,空白調零,于492nm波長測吸光度(A)值。

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