產(chǎn)品概述：H9c2(2-1)-GFP大鼠心肌細胞-綠色標記 培養(yǎng)方法 已通過STR鑒定

細胞名稱H9c2(2-1)（大鼠心肌細胞）

種屬大鼠

年齡（性別）

胚胎

組織來源

心臟，心肌層

生長特性

貼壁

細胞形態(tài)

成肌細胞樣

背景描述

H9c2(2-1)細胞是一株由Kimes·B和Brandt·B從BD1X大鼠胚胎心臟組織的克隆細胞株亞克隆得到的細胞株；H9c2(2-1)細胞表現(xiàn)出許多骨骼肌的特性。H9c2(2-1)細胞中的成肌細胞能融合形成多核的肌管，并對乙酰膽堿的刺激發(fā)生反應。如果培養(yǎng)基中的血清濃度下降到1%，H9c2(2-1)細胞融合發(fā)生得很快。

生長培養(yǎng)基

DMEM高糖(貨號:PM150210)＋10% FBS(貨號:164210-500)＋1% P/S(貨號:PB180120)

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

傳代方法: 1：2至1：6，每周2次。

凍存條件: 90% *培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲存

支原體檢測: 陰性

安全等級: 1

應用: 該細胞可以作為轉(zhuǎn)染宿主細胞。

參考文獻:

Kimes BW, Brandt BL. Properties of a clonal muscle cell line from rat heart. Exp. Cell Res. 98: 367-381, 1976. PubMed: 943302

Levy AP, et al. Post-transcriptional regulation of vascular endothelial growth factor by hypoxia. J. Biol. Chem. 271: 2746-2753, 1996. PubMed: 8576250

細胞圖片：

H9c2(2-1)細胞圖片

H9c2(2-1)細胞圖片

H9c2(2-1)細胞ATCC CRL-1446大鼠心肌細胞特點和簡介

B. Kimes and B. Brandt從源于BD1X大鼠胚胎心臟組織的克隆細胞株亞克隆了H9c2(2-1)細胞株。它表現(xiàn)許多骨骼肌的特性。 這個細胞株中的成肌細胞能融合形成多核的肌管，并對乙酰膽堿的刺激發(fā)生反應。 如果培養(yǎng)基中的血清濃度下降到1%，融合發(fā)生得很快。 在本庫通過支原體檢測。

H9c2(2-1)細胞ATCC CRL-1446大鼠心肌細胞接受后處理

1)  收到細胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。

2)  請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3)  棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。

4)  如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。

5)  接到細胞次日，請檢查細胞是 否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

H9c2(2-1)細胞ATCC CRL-1446大鼠心肌細胞培養(yǎng)操作

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

     1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

     3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

     4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

      1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

      2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

     3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌 儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

H9c2(2-1)細胞ATCC CRL-1446大鼠心肌細胞培養(yǎng)注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細胞因子 等，確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問 題，責任由客戶自行承擔。

3.   用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均 會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯(lián)系，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。

4.   靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng)，待細 胞匯 合度  80%左右時正常傳代。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。

6.   建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和 Procell 技術(shù) 部 溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián) 系，告知細胞的具體情況，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

培養(yǎng)過程詳細圖片變化：

7. 該細胞僅供科研使用。

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