在疫區根據流行病學特點，2個月以上家兔發病快、死亡率高并出現典型的臨診癥狀和病理變化，一般可以作出診斷。在新疫區要確診可進行病原學檢查和血清學試驗等。

1．病毒檢查
取肝病料1Q％乳劑，超聲波處理，高速離心，收集病毒，負染色后電鏡觀察，可發現一種直徑為25～35nm，表面有短纖突的病毒顆粒。

2．動物試驗
該病毒只感染兔，其他動物不感染。取病兔肝、脾等組織懸液的離心上清液，經雙抗處理后，以多種方式接種非免疫青年兔，可成功復制該病，并從患兔體內分離到該病毒。也可將病兔肝、脾做成1：10懸液，給試驗組兔同時注射高免血清3mi和懸液1ml，另設幾只注射病料懸液的對照兔，如試驗組兔精神、食欲、體溫均正常，對照兔死亡，可確診是RHD。

3．血凝與血凝抑制試驗
肝病料lo％乳劑高速離心后的上清液與用生理鹽水配制的o．75％的人[）型紅細胞懸液進行微量血凝試驗，在4℃或25℃作用兒．凝集價大于1：160判為陽性（另外也能凝集人類B型，AB型紅細胞，呈現強烈的陽性反應）。再用已知陽性血清做血凝抑制試驗。如血凝作用被抑制（血凝抑制滴度大于l：80為陽性），則證實病料中含有該病毒。
血凝及血凝抑制試驗快速、簡單，成熟且易于推廣，是確診該病的良好方法。因為除兔細小病毒外，尚無類似疾病的家兔病料能凝集人O型血紅細胞，并能被特異性抗體所抑制，因此也可用血凝抑制試驗測定其抗體效價，進行免疫監測。血凝試驗的方法有玻片法、血凝板法、瓷板法。

4．免疫擴散法
將病兔肝臟乳劑制備的抗原對感染兔血清進行瓊脂糖免疫擴散試驗，可檢出特異性抗體。戴康等發現，以甲醛滅活制備的抗原與抗血清反應時，粗提抗原可出現2～3條沉淀帶，高度提純的抗原則只出現一條沉淀帶。

5．紅細胞吸附病毒——熒光抗體染色法（直接法）
制備RHD高免血清，按常規法提取IgG，用F1TC標記。用l％人O型血紅細胞懸液涂片，自然干燥，冷丙酮固定，4~C冰箱保存備用。病料加PBS（10倍，W／V）并勻漿化（1000r／mill，3min），將懸液3000r／mill離心30min，取上清液加于細胞涂片上，室溫吸附10min，PBS充分沖洗，曬干后加制備的熒光抗體，置37~C濕盒中染色30min，用PBS充分沖洗，蒸餾水沖洗除鹽，干燥后置熒光顯微鏡下觀察，可見到特異性熒光。

6．Dot-ELISA試驗（斑點酶聯免疫吸附試驗） 按楊漢春所建立的方法進行。
判定標準為：+十為呈深棕色斑點，與強陽性相似；十為呈淺棕色斑點，與弱陽性相似；一為未呈斑點，與陰性對照相似。

7．分子生物學診斷技術有反轉錄——聚合酶鏈式反應（RT-PCR） Guttre等以5’末端衣殼蛋白基因為對象設計了RT-PCR和套式RTPCR，給果表明此法比ELlSA敏感10‘倍，可以檢出至少12個拷貝的病毒核酸。

在病毒性出血癥檢測方面，自1984年以來相繼建立了一系列抗原、抗體檢測方法。主要有血凝（HA）和血疑抑制（H”、瓊脂擴散試驗（1D）、免疫酶組化法（BA）、ELISA法、熒抗法、斑點酶聯免疫吸附試驗（Dot-ELISA），DNA探針法等。

雖然上述各種免疫學檢測方法在RHDV的檢測中有一些不可取代的優點，但各自仍有不足之處，或因存在不同程度的假陽性、假陰性和交叉反應，或限于實驗室所需條件，在敏感、特異、簡便、快速、實用等特點上均不夠理想。因此，在RHDV的檢測方面，急需建立符合上述特點的免疫學檢測方法，并結合分子生物學技術等多種診斷方法對兔病毒性出血癥作出確診。