HepG2-GFP人肝癌綠色標記細胞 培養步驟
上海琛藝實業有限公司是一家專注于進口試劑與細胞銷售，實驗室P3級凈化設計與安裝，生物醫藥技術研發與應用為一體的生物高科技公司。公司擁有一支高效率，高技術，高素質的專業團隊，在科研領域與上海中科院生物醫藥與健康研究院、上海交通大學等院校和科研機構建立有穩固的協作伙伴關系，在科學城孵化器設立有P3級實驗室。

原代細胞系構建，耐藥株篩選，Cas9基因敲除株，STR檢測及動物模型構建，課題設計整體服務！細胞-動物產品研發與服務平臺,PDX新一代藥篩平臺.

技術：凡是從我司購進的細胞可聯系工作人員索要相關細胞說明書資料。且提供技術支持服務。

規格：70%密度的T25培養瓶的細胞一瓶/1ml凍存細胞2管，干冰運輸
包裝：細胞代數為4代以內包裝：內層無菌自封袋；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋；或干冰運輸

貨期：4代復蘇細胞，1-2周（不含節假日）/1代凍存細胞，1-2個工作日

售后：收到細胞后7天內，如發現細胞有質量問題（如污染，死亡，快遞運輸等原因）時，應及時拍照反饋給銷售人員，我們將盡快為您解決！

我們的細胞在發貨之前會進行質檢，并在發貨時附帶質檢報告。
質檢內容:
1、細胞存種的活性和增殖檢測
2、發貨前的細菌/真菌/霉菌污染物鏡檢
3、發貨前的支原體/衣原體 PCR檢測
產品名：HepG2-GFP-Puro

物種：人肝癌細胞

保存體系：-80°C短期保存，液氮長期保存

培養條件：DMEM+10%FBS

生長類型：貼壁生長

運輸方式：新鮮細胞常溫運輸，凍存細胞干冰運輸

復蘇流程：細胞復蘇：

1.帶上防護面罩及防凍手套，從液氮罐中取出細胞，并迅速放入37°C水浴鍋中解凍。

2.細胞解凍后，通過傳遞倉將細胞傳遞至細胞房內。

3.在生物安全柜內，取出一只15mL無菌離心管，使用1mL移液器向15mL離心管內加入4mL 培養基。

4.使用75%的醫用消毒酒精棉球仔細擦拭上述在37°C水浴鍋中解凍的細胞凍存管外表面，進行表面消毒。在生物安全柜內，擰開細胞凍存管，然后用1mL移液器將管內的細胞懸液吸出，逐滴加入至上述準備的含有4mL培養基的15mL離心管中，將15mL離心管蓋子旋緊，緩慢上下顛倒4次，使細胞懸液混勻。

5.將含有細胞懸液的離心管置于離心機中，設置離心參數如下：200xg、室溫（~25°C）離心5分鐘。

6.離心結束后，將離心管輕輕轉移至生物安全柜中，此時細胞離心管底部可見白色細胞團。使用電動吸引器將培養基上清吸掉（細胞團比較松散，注意不要觸及底部的細胞團）。

7.使用1mL移液器加入2mL*培養基，輕輕吹打5次重懸細胞團，計數，接種。

8.將細胞放置培養箱中過夜培養。
培養步驟：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL*培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

HepG2-GFP人肝癌綠色標記細胞 培養步驟
 
1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的*培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿，加入5ml左右*培養基混勻，放入培養箱過夜培養后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續培養，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。