人多巴色素異構(gòu)酶(DT)ELISA試劑盒*用于測(cè)定血清、血漿及相關(guān)液體樣本中的含量。試劑盒嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試劑不同批號(hào)組分不得混用。

  ELISA法測(cè)定試劑盒規(guī)格參數(shù)：

  中文名稱：人多巴色素異構(gòu)酶(DT)ELISA試劑盒

  規(guī)格：96T/48T

  性狀：液體

  存儲(chǔ)：4℃保存6個(gè)月

  運(yùn)輸方式：快遞發(fā)貨

  檢測(cè)標(biāo)本：血清，血漿，尿液，胸腹水，腦脊液，細(xì)胞培養(yǎng)上清，組織勻漿等

檢測(cè)方法：雙抗夾心法

人多巴色素異構(gòu)酶(DT)ELISA試劑盒*相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究：

多巴色素異構(gòu)酶調(diào)節(jié)DHICA介導(dǎo)的抗氧化作用機(jī)制研究
摘要：人類表皮黑素細(xì)胞通過產(chǎn)生黑素,從而對(duì)紫外線輻射和氧化應(yīng)急具有關(guān)鍵的防護(hù)作用。黑素在黑素小體(melanosome)中合成。酪氨酸酶(Tyr)、酪氨酸酶相關(guān)蛋白1(Tyrp1)和多巴色素異構(gòu)酶(Dct)以多酶復(fù)合體的形式存在于黑素小體膜,共同參與對(duì)黑素細(xì)胞黑素生成的調(diào)節(jié)。酪氨酸酶家族包括三種成員：酪氨酸酶、酪氨酸酶相關(guān)蛋白1、多巴色素異構(gòu)酶,它們?cè)诤谒睾铣蛇^程中具有不同的作用。Tyr基因與Tyrp1基因發(fā)生突變可引起1型或3型眼皮膚型白化病,但很少有關(guān)于Dct基因突變直接導(dǎo)致人類色素性疾病的報(bào)道。位于小鼠14號(hào)染色體上的Dct基因編碼區(qū)第194位精氨酸被谷氨酰胺置換(R194Q)發(fā)生slaty突變,使Dct酶活性降為野生型的36%。但salty突變黑素細(xì)胞中黑素小體的成熟發(fā)育過程是否受到影響尚不清楚。本研究通過比較salty突變黑素細(xì)胞與野生型melan-a黑素細(xì)胞中黑素生成蛋白表達(dá)與黑素小體的發(fā)育形態(tài),闡述Dct基因突變對(duì)黑素細(xì)胞結(jié)構(gòu)及發(fā)育的影響。盡管人們?cè)缇驼J(rèn)識(shí)到一些黑素生成中間產(chǎn)物,如L-3,4-左旋多巴和DHI,氧化時(shí)能產(chǎn)生大量活性氧基使細(xì)胞造成損傷。
試劑盒的組成： 
（1）結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；
（2）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；
（3）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；
（4）酶的底物；
（5）陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品（定性測(cè)定中），elisa試劑盒參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測(cè)定中）；
（6）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）
用途：科研與實(shí)驗(yàn)試劑，不得用于臨床診斷。
檢測(cè)種屬：人、大小鼠、兔、羊、猴、豬、豚鼠ELISA檢測(cè)試劑盒等種屬。
標(biāo)本：血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。 
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人多巴色素異構(gòu)酶(DT)ELISA試劑盒*雙抗體夾心ELISA法定量測(cè)定人血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體含量。

液體類標(biāo)本：
包括血清，血漿，尿液，胸腹水，腦脊液，細(xì)胞培養(yǎng)上清液等。
血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，如保存過程中如有沉淀，請(qǐng)?jiān)俅坞x心。
血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA，檸檬酸鈉或者肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，在離心20分鐘（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，如保存過程中有沉淀，請(qǐng)?jiān)俅坞x心。
尿液：
用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，如保存過程中有沉淀，請(qǐng)?jiān)俅坞x心。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，當(dāng)細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右，通過反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并釋放細(xì)胞內(nèi)的成份，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，如保存過程中有沉淀，請(qǐng)?jiān)俅坞x心。
組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后，稱取重量，加入一定量的PBS（PH7.4），用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆茫瑯?biāo)本融化后仍保持2-8℃的溫度，加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，分裝后留一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
  酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒原理：

  1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量測(cè)定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測(cè)定方法。這一方法的基本原理是：①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可極大地放大反應(yīng)效果，從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。

  酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒檢測(cè)方法:

  夾心法

  夾心法常用于檢測(cè)大分子抗原，一般之操作步驟為：

  1、將具有專一性之抗體固著（coating）于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體；

  2、加入待測(cè)檢體，檢體中若含有待測(cè)之抗原，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)；

  3、洗去多余待測(cè)檢體，加入另一種對(duì)抗原專一之一次抗體，與待測(cè)抗原進(jìn)行鍵結(jié)；

  4、洗去多余未鍵結(jié)一次抗體，加入帶有酵素之二次抗體，與一次抗體鍵結(jié)；

  5、洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果。

  間接法

  間接法常用于檢測(cè)抗體，一般之操作步驟為：

  1、將已知之抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余之抗原；

  2、加入待測(cè)檢體，檢體中若含有待測(cè)之一次抗體，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié)；

  3、洗去多余待測(cè)檢體，加入帶有酵素之二次抗體，與待測(cè)之一次抗體鍵結(jié)；

  4、洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色，藉儀器（ELISA reader）測(cè)定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評(píng)估有色終產(chǎn)物的含量即可測(cè)量待測(cè)抗體的含量。

  競(jìng)爭(zhēng)法

  競(jìng)爭(zhēng)法是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制，一般用于檢測(cè)小分子抗原，其操作步驟為：

  1、將具有專一性之抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體；

  2、加入待測(cè)檢體，使檢體中的待測(cè)抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)；

  3、加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)，由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限，因此當(dāng)檢體中抗原的量越多，則帶有酵素之抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競(jìng)相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié)，即所謂競(jìng)爭(zhēng)法之由來；

  4、洗去檢體與帶有酵素之抗原，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色，當(dāng)檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酵素的抗原越少，顯色也就越淺。

  當(dāng)需要偵測(cè)無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時(shí)，一般會(huì)考慮使用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。

  酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒結(jié)果判斷：

  定性測(cè)定

  定性測(cè)定的結(jié)果判斷是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測(cè)抗原或抗體作出"有"或"無"的簡(jiǎn)單回答，分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標(biāo)本在該測(cè)定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來表示反應(yīng)的強(qiáng)度，其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn)。在這種半定量測(cè)定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn)，呈陽性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽性、弱陽性更具定量意義。

  在間接法和夾心法ELISA中，陽性孔呈色深于陰性孔。在競(jìng)爭(zhēng)法ELISA中則相反，陰性孔呈色深于陽性孔。

  定量測(cè)定

  ELISA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的*，因此在定量測(cè)定中，每批測(cè)試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線zui高點(diǎn)的吸光度可接近2.0，繪制時(shí)常用半對(duì)數(shù)紙，以檢測(cè)物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點(diǎn)連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是的檢測(cè)區(qū)域。

  測(cè)定小分子量物質(zhì)常用競(jìng)爭(zhēng)法，其標(biāo)準(zhǔn)曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負(fù)相關(guān)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。ELISA測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線注意圖中橫坐標(biāo)為對(duì)數(shù)關(guān)系，這更有利于測(cè)定系統(tǒng)的表達(dá)。

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