手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
慢病毒包裝簡要程序：
以六孔板中的1孔為例，每個樣品需要1×10∧6個293FT細(xì)胞。
1、取1.5ml滅菌EP管，加入1.5μg包裝混合質(zhì)粒和0.5μg表達(dá)質(zhì)粒以及250μl的無血清Opti MEM。輕柔混勻，室溫孵育5min。
2、取1.5ml滅菌EP管，取9μl 脂質(zhì)體2000l溶于250μl無血清Opti-MEM I培養(yǎng)基中。輕柔混勻，室溫孵育5min。
3、將DNA溶液和脂質(zhì)體溶液輕柔混勻。室溫孵育20min
4、用胰酶消化并記數(shù)293FT細(xì)胞。用含血清的DMEM培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
5、在六孔板中每孔，加入1ml含血清的生長培養(yǎng)基，再加入DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物。
6、將1ml重懸的293FT細(xì)胞（1×10∧6個細(xì)胞/ml）加入到平板中。37℃CO2孵箱中孵育過夜。
7、移除含有DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物的培養(yǎng)基移除，代之以DMEM（含丙酮酸鈉和非必須氨基酸）。
7、轉(zhuǎn)染后48-72h收獲含病毒的上清。3000 rpm 離心20min，去除沉淀。
8、病毒上清-80°C貯存。
包裝出來的慢病毒對NIH/3T3細(xì)胞達(dá)90%以上感染效率
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心