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鯉浮腫病毒(CEV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)使用步驟

來源:上海一研生物科技有限公司   2020年03月26日 14:09  

鯉浮腫病毒(CEV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)使用步驟:

一、樣品 RNA 的制備

1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司的一管式病毒 RNAout

2、或柱式病毒 RNAout。

二:RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應合成 cDNA

1. 按下表配制 RT 反應體系(20 μL 體系)

2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。

3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),

反應終體積為 20μL。

4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。

5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。

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