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細胞免疫熒光實驗步驟

來源:上海嶸崴達實業有限公司   2011年07月19日 14:27  

                                         細胞免疫熒光實驗步驟

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1. 細胞一定要貼在玻片上(可以放入24孔板),為后面照像打基礎。細胞密度適中,大約60-75%滿片即可,否則容易脫片。

2. 取出細胞后用4%多聚甲醛固定15分鐘,現用現配。(以下各步驟切毋使玻片干燥)

3. PBS沖洗

4. 0.1%Triton作用20分鐘

5. PBS沖洗
 
6. 10%正常血清封閉10分鐘

7. 加入一抗,4度孵育過夜(找個小瓶蓋將小玻片支起來,抗體就不容易溢出),還要記住“砸片”,就是抗體從較高處落到片子上,以分布均勻。抗體稀釋度1:60,較常用!

8. PBS沖洗4次,各5分鐘

9加入熒光二抗,室溫30分鐘。抗體稀釋度1:400,較常用!

10.  同8。

11. 90%甘油封片。也很關鍵阿,多封幾次才有體會。

12. 避光保存,或到顯微鏡下觀察。
 
 

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