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A549/L人肺癌耐奧沙利鉑細胞株 細胞培養步驟

來源:上海琛藝實業有限公司   2020年05月24日 17:55  

細胞系特征                     

細胞株名稱:A549/L人肺癌耐奧沙利鉑細胞株 細胞培養步驟

種屬:人,女性

組織來源:肺癌

生長特性:貼壁生長

形態特征:上皮細胞

微生物及支原體檢測:陰性

安全性:所有腫瘤和病毒轉染的細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。

培養條件:

*培養基:90%RPMI-1640+10%胎牛血清+1ug/ml DDP

血清我們推薦用:

GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。

培養條件:37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

傳代方法:

收到細胞后,在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

(一)如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶,吸出培養液,換 10ml新鮮培養液后繼續培養。

(二)如果細胞已長滿,即可進行傳代培養。具體步驟如下:

1. 棄去培養液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。

2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,倒放于37℃培養箱1-3分鐘預熱,之后翻轉培養瓶10-30秒,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量*培養基終止消化。 

3. 按6-8ml/瓶補加*培養基,輕輕打勻后吸出一半,分到新的培養瓶中。如果沒有特別說明,收到細胞后的一次傳代一般是一傳二。

注:1、觀察細胞好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X或20X物鏡下。

2、瓶中運輸培養基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養基,細胞凍存后,培養基中可不加任何抗生素。

3、有些細胞貼壁不牢,如發現貼壁細胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶內。

4、收到細胞后,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請及時與我們聯系。..

 

凍存方法:   凍存液:90%胎牛血清,10%DMSO

  儲存:液氮儲存

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