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所謂分光，是利用色散現象可以將波長范圍很寬的復合光分散開來，成為許多波長范圍狹小的“單色光”，這種作用稱為“分光”。像我們所知的，使用棱鏡可以將太陽光分解為七色光，彩虹的形成就是為人所熟知的分光現象。
分光不同于棱鏡分光（折射法）一種。但其他的分光現象一般需要較為復雜的方法實現，不太常見。具體的類型如下：
1）利用棱鏡來分光（光的折射率依賴于波長）；
2）利用衍射現象來分光；
3）利用法布里-珀羅標準具來分光；
4）利用邁克爾遜干涉+傅立葉變換的傅立葉分光：
5）利用光散射的分光。
分光光度計使用了兩個部分來實現其檢測的功能。第一部分是分光，將所使用的特定光源所發出的復合光分解為“單色光”，這些光通過樣品，一部分光會被吸收或反射。第二部分是檢測裝置，對通過了樣品的光進行分析，可以了解到某一波長段的光會出現大幅減少或其他的變化。這些變化的原因正是樣品中含有某些特定的物質造成的。
分光光度計的具體使用方法：
（1）儀器預熱。打開樣品室蓋（光門自動關閉）。開啟電源，指示燈亮，儀器預熱20 min。選擇開關置于“T”旋鈕，使數字顯示為“00.0”。
（2）旋動波長手輪，把所需波長對準刻度線。
（3）將裝有溶液的比色皿放置比色架中，令參比溶液置于光路。
（4）蓋上樣品室蓋，調節透光率“100％T”旋鈕，使數字顯示為“100.0T”。（如顯示不到100％T，則可加按一次。
（5）吸光度A的測量：儀器調T為0和100％后，將選擇開關轉換至A調零旋鈕，數字顯示應為“.000”。然后拉出拉桿，使被測溶液置入光路，數字顯示值即為試樣的吸光度A。
（6）測定完畢后，先打開樣品室蓋，再斷電源。比色杯應清洗干凈后，再貯放保存。
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