細胞用途 僅供科研使用：Huh-7/Sorafenib人肝癌索拉非尼耐藥株|Huh-7細胞

生長特性 貼壁

細胞背景 生長特性：貼壁生長

微生物及支原體檢測：陰性

培養 *培養基：90%RPMI-1640+10%胎牛血清+1ug/ml DDP

血清我們推薦用:

GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。

培養條件：37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

細胞特性

1）來源：人

2）形態：貼壁生長

3）含量：>1x106 個/mL

4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5）規格：T25瓶

Huh-7/Sorafenib人肝癌索拉非尼耐藥株|Huh-7細胞

細胞培養步驟 收到細胞后，在倒置鏡下(好是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

（一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，吸出培養液，換 10ml新鮮培養液后繼續培養。

(二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養。具體步驟如下：

1. 棄去培養液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，倒放于37℃培養箱1-3分鐘預熱，之后翻轉培養瓶10-30秒，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量*培養基終止消化。 

3. 按6-8ml/瓶補加*培養基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養瓶中。如果沒有特別說明，收到細胞后的一次傳代一般是一傳二。

注：1、觀察細胞好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X或20X物鏡下。

2、瓶中運輸培養基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養基，細胞凍存后,培養基中可不加任何抗生素。

3、有些細胞貼壁不牢，如發現貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內。

4、收到細胞后，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們聯系。..

保存 凍存條件：90%*培養液+10%DMSO 

保存條件：液氮存儲

常見問題及解決方案 1.培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。

2.收到細胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養基，如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基，請在原瓶培養基中額外添加 10%的血清（原瓶培養基的繼續使用時間長不宜超過 72 小時）

3.細胞漂浮：培養瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。1-2小時后觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留8-10ml培養液培養觀察，細胞生長至匯合度80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。