蛋白質(zhì)是生命的基石，它們幾乎在地球的每一種生物中都能被找到，對(duì)我們的生存很重要。一些蛋白質(zhì)例如抗體、酶、激素等會(huì)參與化學(xué)反應(yīng)免疫過(guò)程以及細(xì)胞活動(dòng)。蛋白質(zhì)還在運(yùn)動(dòng)、結(jié)構(gòu)支持、存儲(chǔ)能量、細(xì)胞消化、底物運(yùn)輸?shù)确矫嫫鹱饔谩５鞍踪|(zhì)由長(zhǎng)鏈氨基酸組成，形成多種多樣，不同形狀大小的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)因?yàn)槠洳煌拈L(zhǎng)鏈氨基酸組成，每一種類型都有穩(wěn)定特別的三維結(jié)構(gòu)。這種特殊的結(jié)構(gòu)是至關(guān)重要的，每一個(gè)形狀的改變都會(huì)引起蛋白質(zhì)功能的變化。所以說(shuō)像蛋白質(zhì)這種對(duì)熱敏感的分子，在分子下游分析過(guò)程之前的樣品制備就顯得格外重要。Precellys Evolution結(jié)合Cryolys Evolution冷卻系統(tǒng)能夠有效的在研磨過(guò)程中使研磨腔室溫度穩(wěn)定保持在4℃。

使用Precellys提高組織蛋白質(zhì)的提取量

APPNOTE 1：從大鼠皮膚組織提取蛋白質(zhì)沉淀和脂肪

APPNOTE 2：使用Minilys從小鼠心臟組織從提取蛋白質(zhì)

Protocol 1：大體積大腸桿菌中提取蛋白質(zhì)

Protocol 2： 96通道眼睛組織中提取蛋白質(zhì)

APPNOTE 1

從*勻質(zhì)的大鼠皮膚組織中提取蛋白質(zhì)沉淀和脂肪

本應(yīng)用中研究了從大鼠皮膚組織中提取蛋白質(zhì)沉淀和有生物活性的脂肪。本應(yīng)用中利用固相萃取與液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS/MS）來(lái)測(cè)組織中脂肪含量。大鼠皮膚組織使用Precellys Evolution生物樣品研磨器和Cryolys冷卻系統(tǒng)進(jìn)行研磨，配合7mlCKMix50_研磨管。此外還測(cè)試了在大鼠組織整個(gè)研磨的過(guò)程結(jié)束后，樣本溫度都在40℃以下。

實(shí)驗(yàn)材料

自動(dòng)研磨器：Precellys Evolution生物樣品研磨器和Cryolys冷卻系統(tǒng)；

研磨管：CKMix50_7ml（Cat #: KT03961-1-306.7）；

組織樣本：大鼠皮膚組織（后足背側(cè)和腹側(cè)）；

干冰；

Buffer：甲醇。

實(shí)驗(yàn)方法

20-90mg成年大鼠皮膚組織（后足背側(cè)和腹側(cè)），7ml研磨管加2.8mm和5.0mm陶瓷珠，500µL甲醇；轉(zhuǎn)速8000rpm，5個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)10s，循環(huán)之間間歇120s；Cryolys冷卻系統(tǒng)將腔室內(nèi)溫度降至5℃時(shí)開(kāi)始研磨；研磨結(jié)束之后立即使用溫度探針檢測(cè)樣本管內(nèi)的溫度。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

如下圖1、2所示，圖1中a、b分別為研磨前與研磨后效果對(duì)比，結(jié)果顯示皮膚樣本被充分研磨；圖2為樣本被勻質(zhì)后經(jīng)過(guò)固相萃取，用LC-MS/MS技術(shù)檢測(cè)，成功檢測(cè)到花生四烯酸，5-HETE、8-HETE、9-HETE的濃度分別為1.3 ±0.3、7.9±0.6和1.3 ± 0.4 ng/mg。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

大鼠的后爪皮膚比背部皮膚厚，因此獲得其完整勻質(zhì)的難度更大，使用Precellys Evolution生物樣品研磨器，結(jié)合Precellys裂解試劑盒成功研磨大鼠后爪皮膚組織。本應(yīng)用同樣也展示了Cryolys冷卻系統(tǒng)能夠保證樣本溫度在40℃以下。

APPNOTE 2

使用Minilys從小鼠心臟組織中提取蛋白質(zhì)

開(kāi)曼化學(xué)研究和生產(chǎn)抗體，為了營(yíng)造更好的研究市場(chǎng)。為了保證質(zhì)量，需要合適的組織裂解產(chǎn)物來(lái)確保我們的產(chǎn)品達(dá)到或者超過(guò)我們質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)。我們很多目標(biāo)蛋白都是多通道跨膜受體，因此需要一個(gè)非常強(qiáng)力的裂解系統(tǒng)。

實(shí)驗(yàn)材料

Minilys生物樣品研磨器；CKMix 2mL (KT03961-1-009.2)研磨管；920mg小鼠心臟組織；裂解Buffer：920µL M-PER (Mammalian Protein Extraction Reagent, Pierce)。

實(shí)驗(yàn)方法

Minilys研磨參數(shù)：研磨速率5000rpm；4個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)20s，循環(huán)之間間歇5s；

分析方法：使用Minilys研磨樣本之后，從中提取細(xì)胞質(zhì)和膜蛋白；HEK 293細(xì)胞（S1P3轉(zhuǎn)染和未轉(zhuǎn)染）在細(xì)胞培養(yǎng)板上培養(yǎng)，隨后提取蛋白質(zhì)；所有的蛋白通過(guò)BCA法測(cè)定，溶菌產(chǎn)物通過(guò)Western Blot分析。

結(jié)果如圖所示：圖1為使用S1P3多克隆抗體；一列為3µLMark，第二列為2.5μgS1P3轉(zhuǎn)染過(guò)的HEK293細(xì)胞裂解產(chǎn)物，第三列為5μgS1P3轉(zhuǎn)染過(guò)的HEK293細(xì)胞裂解產(chǎn)物，第4列為50μg小鼠心臟膜蛋白裂解產(chǎn)物。結(jié)果顯示均有很好的條帶，研磨提取效果好。圖2為使用一種視神經(jīng)多克隆抗體（C-Terminal）；一列為3µLMark，第二列為60μgHEK293細(xì)胞裂解產(chǎn)物，第三列為40μgHEK293細(xì)胞裂解產(chǎn)物，第四列為50μg小鼠心臟細(xì)胞質(zhì)裂解產(chǎn)物，第五列為小鼠心臟膜蛋白裂解產(chǎn)物，結(jié)果顯示均有很好條帶，研磨提取效果好。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

Minilys生物樣品研磨器結(jié)構(gòu)緊湊，使用方便，Minilys提供了更純凈、更濃縮的裂解產(chǎn)物，對(duì)目標(biāo)蛋白分析有很高的重復(fù)性。Minilys可同時(shí)研磨3個(gè)樣本，可用2ml或0.5ml研磨管，是低通量實(shí)驗(yàn)的理想選擇。

Protocol 1

大體積大腸桿菌中提取蛋白質(zhì)方案

研磨管：7ml VKMix_或15mlVK05_

樣本量：5ml或10ml（OD600下為50）

研磨參數(shù)：7ml：轉(zhuǎn)速9000rpm，6個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)30s，循環(huán)間歇60s；15ml：轉(zhuǎn)速9900rpm，6個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)60s，循環(huán)間歇60s

Protocol 2

96通道從眼組織中提取蛋白質(zhì)

研磨管：CKMix_WP

樣本：視網(wǎng)膜神經(jīng)或眼杯

Buffer：50µL M-PER

研磨參數(shù)：視網(wǎng)膜：轉(zhuǎn)速5500rpm，3個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)30s，循環(huán)間歇30s；眼杯：轉(zhuǎn)速8200rpm，3個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)30s，循環(huán)間歇30s。

Precellys生物樣品研磨器：

超快速: up to 10 000 rpm

超靈活: 0.5, 2, 7和 15mL研磨管

超高效: 強(qiáng)力3D振動(dòng)

超保護(hù): Cryolys Evolution新型冷卻技術(shù)，無(wú)需液氮和壓縮空氣