酵母蛋白抽提試劑盒說明書

Yeast Protein Extraction Kit

目錄號(hào)：K0890   

保存：蛋白酶抑制劑混合物：-20℃

    其它組分：室溫  

組分說明

Catalog no.                   K0890       K0890A

Kit Size                      25  次       100  次

Yeast Protein Extraction Reagent           25 ml       100 ml

蛋白酶抑制劑混合物                         250  μl        1 ml

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

      酵母蛋白抽提試劑用于從酵母細(xì)胞中快速，高效而溫和地抽提可溶性蛋白。采用試劑處理，可以避免激烈的機(jī)械處理造成的氧化和熱度升高對(duì)目的蛋白的破壞作用。使用方便，避免了重復(fù)性差的研磨法，超聲波法或壓榨法對(duì)酵母細(xì)胞的破壞。本抽提試劑可用于提取啤酒酵母、裂殖酵母、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌及革蘭氏陽(yáng)性菌的蛋白抽提。與傳統(tǒng)方法相比，

處理得到的提取液中可溶蛋白產(chǎn)量大，活性高，提取快速；提取液可以直接用于 Ni-NTA  、GST 等親和純化。酵母蛋白抽提試劑盒中帶有蛋白酶抑制劑混合物，可有效避免蛋白提取過程中蛋白的降解。

注意事項(xiàng)

 1. 提取液中含有去污劑，不宜使用受去污劑干擾的蛋白定量方法。

 2. 為了獲得實(shí)驗(yàn)j效果，請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整Z佳使用量。

 3. 本產(chǎn)品僅用于科研。

操作步驟  

 1.  酵母培養(yǎng)液3000 xg，4℃，離心5分鐘（離心后馬上抽提或置于-20℃或-80℃保存）。

 2.  請(qǐng)?jiān)诘鞍壮樘崆叭〕鰧?shí)驗(yàn)所需蛋白抽提試劑進(jìn)行預(yù)冷，  按照1:99比例加入蛋白酶抑制劑混合物（例如990μl抽提試劑中加入10μl蛋白酶抑制劑混合物），使蛋白酶抑制劑混合物在抽提試劑中成1×工作液。

     注意：在進(jìn)行蛋白抽提前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑混合物。

 3.  按照每50 mg酵母加入500  μl酵母蛋白抽提試劑加入抽提液，渦旋振蕩或上下吸打使酵母充分重懸。

 4.  將細(xì)胞懸液置于冰上，孵育20分鐘（每間隔幾分鐘輕微搖晃一下）。

 5.  12,000 rpm（13,400 xg）離心10分鐘取上清（可提取超過90%的可溶性蛋白，如有需要，可將沉淀進(jìn)行第二次蛋白抽提）。

 6.  上清可進(jìn)行下一步的蛋白含量測(cè)定、純化及分析。

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